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铁离子和铁蛋白基因在文蛤幼虫发育过程中的调控作用

王晓梅;刘保忠;相建海

  通过文蛤铁蛋白(MmeFer)EST 序列信息,克隆获得 MmeFer 一个亚基的全长 cDNA 序列。利用 real-time 技术比较 MmeFer 在文蛤幼虫四个发育时期的表达情况,分别是担轮幼虫期(L1)、D 形幼虫期(L2)、壳顶幼虫期(L3)和稚贝期(L4)。通过整体原位杂交(WISH), 分析了 MmeFer mRNA 在幼虫发育过程中的分布。人工海水(ASW)培养囊胚期幼虫实验, 分析了铁含量为0μM,1μM和100μM的条件下幼虫的生长情况,WISH 分析了 ASW 培养的幼虫 MmeFer mRNA 的表达部位。实验结果表明,MmeFer cDNA 长度为798个碱基,5 UTR 含有一个铁调节元件(IRE, iron regulatory element),开放阅读框编码171个氨基酸,其中含有7个组成亚铁氧化酶中心的保守氨基酸残基,说明该基因编码 H-ferritin。MmeFer 在 L1期表达量很少,在 L2、L3 期表达水平显著升高。在 L1期,MmeFer 在贝壳生成的部位表达,在后面3个时期主要出现在消化腺和其周围的组织。ASW 培养发现,无铁的环境下,幼虫发育停留在 L1期的畸形状态,有铁条件下,幼虫长出透明的壳状物,其大小和完整度随铁浓度增加而增大。WISH 发现 MmeFer 的表达在壳状物的附近。上述实验结果显示,铁离子对于幼虫发育生长十分重要,尤其是胚壳的发生和生长。铁的主要储存和代谢蛋白 MmeFer 也参与了这个过程的调控。……