手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

舌癌耐药细胞系的建立及耐药相关基因鉴定

郑国沛;周敏;余艳辉;彭波;王成昆;谷依学;欧阳咏梅;贺智敏

  目的:建立平阳霉素诱导的舌癌多药耐药细胞系,探讨舌癌多药耐药机制。方法:采用抗癌药平阳霉素(pingyangmycin,PYM,又称博莱霉素A5)低浓度递增结合大剂量间歇法体外诱导舌癌细胞系(Tca8113)一年余,通过MTT、流式细胞计数、Western blot等方法检测诱导细胞(Tca8113/PYM)对PYM及多个抗癌药物的敏感性、计算各药的耐药指数(resistant index,RI),评价细胞的生物学特征;全基因组芯片筛选Tca8113/PYM细胞与其亲本细胞Tca8113的差异表达基因,实时定量PCR和Western-blot验证选择的差异基因并对舌癌耐药相关基因(TCRP1)和碳酸酐酶Ⅸ(CA9)基因在介导舌癌耐药中的作用进行了进一步鉴定。结果:①Tca8113/PYM细胞对PYM的耐药性比亲本细胞Tca8113提高17.78倍,对顺铂(cDDP),泰素(TAXOL),丝裂霉素C(MMC),吡柔比星(THP),阿霉素(ADM)的RI分别为3.49,2.14,1.99,1.88,1.81(p<0.05),对鬼臼乙甙(VP-16)及5-氟脲嘧啶(5-FU)的RI分别为1.56和1.01(p>0.05);②与Tca8113细胞相比,Tca8113/PYM细胞生长增殖速度无明显改变(p>0.05),耐药膜蛋白ABCB1(Pgp170)、ABCC1(MRP1)及ABCG2(BCRP)表达无明显差异(p>0.05),但对药物的凋亡抗性明显增强(p<0.05);③基因芯片检测发现Tca8113/PYM细胞有41个基因和4个EST表达上调,48个基因和9个EST表达下调,在对其中CA9等4个基因和AL707095等4个EST的验证中发现其表达与上述芯片结果一致;④在EST AL707095基础上克隆和鉴定了与cDDP耐药相关的舌癌耐药相关新基因(TCRP1);⑤采用碳酸酐酶抑制剂乙酰唑胺处理发现在Tca8113/PYM细胞高表达的CA9基因通过主要通过提高Tca8113/PYM培养基的pH值而介导其对PYM和TAXOL的耐受。结论:成功建立起一株新的舌癌多药耐药细胞模型和舌癌多药耐药差异基因表达谱及数据库,为逆转舌癌耐药提供了以TCRP1和CA9基因为代表的一系列耐药靶标。……