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猪β防御素2在毕赤酵母中的分泌表达及其抗菌活性研究

彭子欣;冯秋月;吴雅琨;陈慧鑫;谢飞;宋维平;王安如

  猪β防御素2(pBD2)是广泛存在于猪肠道、肝脏、肺和骨髓等多种组织细胞内的一类活性阳离子多肽,在猪内在防御系统中发挥着重要作用。本研究根据毕赤酵母密码子的偏好性设计合成了138bp的pBD2成熟肽基因,克隆入毕赤酵母表达载体pPICZαA的EcoRI和KpnI酶切位点,构建重组表达载体pPIBD。经SacI线性化的pPIBD电击转化毕赤酵母,经PCR鉴定阳性重组菌。经过摇瓶发酵和甲醇诱导,阳性重组菌的发酵上清液对猪常见病原菌,金黄色葡萄球菌、大肠杆菌K88、猪链球菌、猪霍乱沙门氏菌和副猪嗜血杆菌具有较强的抑制作用。最小抑菌浓度测定显示重组pBD2对猪霍乱沙门氏菌的抑制作用最强。抑菌实验还显示重组pBD2对益生菌枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌和酿酒酵母也具有抑制作用。pH值和热稳定性实验显示,重组pBD2对pH值和高温有很好的耐受性,在pH值4.0~10.0和100℃加热20min,对金黄色葡萄球菌的抑菌活性没有发生改变。本研究结果显示,重组表达的猪防御素具有广谱抗菌能力,可以成为新型抗生素的替代品,未来将在动物养殖、疾病预防和提高畜产品品质等方面发挥更大作用。……