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内源性禽白血病病毒SD0501株感染性克隆的构建及鉴定

孔义波;张兴晓;姜世金;赵钦;孙亚妮

  以测序完成的ALV/SD0501株全基因cDNA序列为模板,设计合成了五对引物,经PCR成功扩增出了5段连续的、相互部分重叠的目的DNA片段,顺次连接入pUC19载体,经酶切、测序验证分析,表明获得了含有完整ALV/SD0501前病毒基因组的分子克隆,命名为ALV/pSD0501。质粒pSD0501纯化后,转染CEF,维持8天后,使用自行制备多克隆抗体进行IFA检测,结果表明在转染CEF细胞中有针对内源性ALV/SD0501 env基因蛋白的表达,表明转染拯救成功,获得了具有感染性的病毒。……