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变性高效液相色谱技术在家族性高胆固醇血症点突变检测中的应用

王绿娅;蔺洁;陈立伟;潘晓冬;杜兰平;秦彦文;刘舒;陈保生

  目的以变性高效液相色谱(DHPLC)分析检测家族性高胆固醇血症(FH)1汉族家系成员的低密度脂蛋白受体(LDLR)基因突变以明确诊断。方法收集1临床诊断为家族性高胆固醇血症的汉族家系共37名成员,其中30人为一级和二级亲属,7名为亲属配偶作为对照,提取基因组DNA,PCR方法扩增LDLR基因包含启动子和全部基因编码区(1-18外显子)及临近的内含子序列共21个片段,琼脂糖凝胶电泳鉴定产物,采用变性高效液相色谱(DHPLC)技术检测了中国LDLR基因,对洗脱曲线异常者进行核苷酸序列测定分析。结果经变性高效液相色谱该家系中发现4处变异,其中1处经核苷酸序列测定明确了突变的性质为第3内含子的剪接突变,并在此家系4名成员中得到证实,而对照组中未检出。结论成功地建立了以DHPLC筛查LDLR基因点突变的方法及技术参数,该方法简便,结果稳定,可作为大样本筛查突变位点的一种便捷可靠手段。……