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庚型肝炎病毒E2区cDNA在毕赤酵母中的表达及抗原性鉴定

王卓华;叶凯;徐洪;马辉文;童立恒;彭习亮

  利用PCR技术从含有庚型肝炎病毒(CBV C/HCV)包膜蛋白E2cDNA(559bp)的质粒pCEX-E2中,扩增得到能够编码日本血吸虫谷胱甘肽硫转移酶(GST)和CBV-C/HCV包膜蛋白E2的融合基因片段。将此长度为1324bp的DNA片段插入到酵母表达载体pPIG9中,使之位于α因子信号肽下游,且与之同框。通过电击转化将构建的重组表达质粒pPIG9K-GST插入到Pichia pastoris CS115菌株染色体中。筛选His+Mu1表型的转化子。振荡培养,用0.5%甲醇诱导表达5d后,在培养液中得到表达的GST-E2融合蛋白。经过表达条件的优化,GST-E2蛋白可占培养液中总蛋白的50%。通过谷胱甘肽亲和层析柱纯化,GST-E2融合蛋白的纯度可达95%左右。以庚型肝炎病人血清为探针,进行免疫印迹及ELISA实验,结果表明该融合蛋白具有被庚型肝炎病人血清特异性质别的抗原性。……