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P44/42MAPK及P38MAPK在氯化镉致肾上腺皮质细胞凋亡中作用初探

张波;杨杏芬;黄俊明;林忠宁;魏青;陈壁锋;黄琼;杨影;赵敏

  目的:观察氯化镉对豚鼠肾上腺皮质细胞凋亡的影响,并探讨P44/42MAPK及P38MAPK在此过程中的可能作用。方法:体外原代培养豚鼠肾上腺皮质细胞,以0μmol/L、12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L及200μmol/L氯化镉处理细胞2小时,用AnnexinⅤ-FITC/PI联合染色,流式细胞仪检测细胞凋亡率;处理1小时,提取细胞蛋白质,经SDS-PAGE、Western blot测定P44、P42、P38的磷酸化水平及相应的不依赖磷酸化的蛋白水平。以100μmol/L氯化镉染毒0.5h、1h、2h、3h及4h检测细胞凋亡率,在染毒15min、30min、60min、90min及120min后测定P44、P42、P38的磷酸化水平及相应的不依赖磷酸化的蛋白水平。结果:0μmol/L、12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L及200μmol/L氯化镉处理细胞2小时,细胞凋亡率分别为:1.99%、14.79%、35.28%、44.62%、55.91 %和73.48%;100μmol/L氯化镉处理细胞0h、0.5h、1h、2h、3h及4h,细胞凋亡率分别为:1.04%、14.70%、33.99%、49.36%、61.57%和71.55%。0μmol/L、12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L及200μmol/L氯化镉处理细胞1小时,与对照组相比,P44的磷酸化水平分别为:100%、107.1%、195.3 %、223.4%、314.6%和418.0%;P42的磷酸化水平分别为:100%、105.2%、127.2%、130.5%、178.2 %和234.2%;P38的磷酸化水平分别为:100%、236.3%、437.4%、472.9%、582.5%和607.5%。在上述情况下,不依赖磷酸化的P44、P42及P38蛋白水平的变化没有统计学意义。100μmol/L氯化镉染毒0min、15min、30min、60min、90min及120min,P44的磷酸化水平分别为:100%、145.9%、409.4 %、588.4%、685.2%和627.7%,P42的磷酸化水平分别为:100%、112.7%、153.6%、187.6%214.7 %和206.7%,P38的磷酸化水平分别为:100%、214.2%、266.4%、276.9%、264.8%和303.0%。结论:12.5μmol/L~200μmol/L的氯化镉在离体情况下呈剂量依赖和时间依赖的方式诱发豚鼠肾上腺皮质细胞凋亡;12.5μmol/L~200μmol/L的氯化镉在离体情况下呈剂量依赖和时间依赖的方式诱导豚鼠肾上腺皮质细胞中P44/42MAPK、p38MAPK磷酸化水平升高,P44/42MAPK、p38 MAPK磷酸化水平升高和凋亡发生的时间效应等结果提示,P44/42MAPK、p38 MAPK可能在氯化镉诱导豚鼠肾上腺皮质细胞凋亡中发挥作用。……