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PCR方法获取南极衣藻Chlamydomonas L4的Ribosomal protein L9基因

王能飞;金治平;赵爱云;付春祥;沈继红

  本文采用SMART(Switching mechanism at 5’end of RNA transcript)技术,构建了南极衣藻L4(Chlamydomonas L4)的全长cDNA文库。按TRIzol试剂盒的操作程序提取对数期南极衣藻L4的总RNA,以此为模板,通过PowerScript逆转录酶逆转录合成第一链cDNA;再以第一链 cDNA产物为模板;用LD-PCR合成第二链cDNA。该cDNA产物经分级分离转入体外包装,即获得南极衣藻L4cDNA原始文库,其滴度为2.6×106pfu/mL。扩增后的cDNA文库的滴度为2.4× 1010pfu/mL。取适量扩增文库稀释并铺平板,挑取72个独立噬菌斑,用PCR方法测得文库的重组率大于96%,插入cDNA的长度平均为1.6kb。对72个独立噬菌体所插入的cDNA进行测序,克隆到了一个具有5’和3’非编码区的Ribosomal protein L9核糖体蛋白基因。……   
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