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栉孔扇贝血淋巴中酯酶活性及其性质

孙虎山;王宜艳

  采用紫外分光光度法测定了栉孔扇贝(Chlamys farreri)血淋巴中酯酶的活性,并对底物、抑制剂、激活剂、温度、pH对酯酶酶活力的影响及酶的热稳定性等性质进行了研究。结果表明,栉孔扇贝血清与血细胞中均存在酯酶,且血细胞中的酶活力高于血清。血清4℃保存24h后酶活力丧失1%以下,样品在24h内测定其酯酶活力,对测定结果影响不大。用不同的底物测定血清中酯酶活力时,酶活力从高到低的顺序为:α-醋酸萘酯>α-丁酸萘酯>乙酰胆碱>β-月桂酸萘酯>4-甲基伞形酮乙酯>丁酰胆碱,在此6种底物中用于测定血清中酯酶活力的最适底物为α- 醋酸萘酯。血细胞中酯酶活力从高到低的顺序为:α-丁酸萘酯>α-醋酸萘酯>丁酰胆碱>乙酰胆碱>β-月桂酸萘酯>4-甲基伞形酮乙酯,在此6种底物中用于测定血细胞中酯酶活力的最适底物为α-丁酸萘酯。10mmol/L EDTA对酯酶起明显的抑制作用。10mmol/β-苯丙酸、1mmol/ L L-半胱氨酸、和0.1mmoL/L毒扁豆碱均对酯酶起激活作用,其中0.1mmol/L毒扁豆碱处理组酯酶活力最高。另外,经1mmol/LCuSO4、1mmol/LPb(NO3)2和0.1mmol/LPCMB处理的3组未检测到酯酶活力,酶被完全抑制。作用底物为α-醋酸萘酯时,酯酶的最适pH为7.5;底物为α-丁酸萘酯时,酯酶的最适pH为8.0。低于此2个值时,酶活力下降速度较快,当高于这2个值时,酶活力下降相对较慢。并且用2种底物测定酯酶活力时,均在pH5.0的酸性区域还有1个小的峰。 pH4.5-6.5时用底物α-醋酸萘酯测定得到的酶活力高于用α-丁酸萘酯作底物,而pH7.0-9.0 时结果正好相反,即用α-丁酸萘酯作底物酶活力较高。相同pH下,用Tris-HCl缓冲液较用二甲胂酸钠-HCl为缓冲液酶活力较高。采用Tris-HCl缓冲液,α-醋酸萘酯为底物,pH7.5时,最适温度为45℃;而α-丁酸萘酯为底物,pH8.0时,最适温度为40℃。酶的热稳定性研究,分别以α -醋酸萘酯和α-丁酸萘酯为底物测定时,酯酶活力变化相似:在20℃时活力最高,而后逐渐下降, 升至80℃时,酶活力丧失约75%。酯酶是一个复杂的酶群,栉孔扇贝血清中的酯酶不受0.1mmol/ L毒扁豆碱的抑制说明可能不含羧酸酯酶;不受10mmol/Lβ-苯丙酸的抑制说明可能不含乙酰酯酶;被1mmol/L CuSO4、1mmol/LPb(NO3)2和0.1mmol/PCMB完全抑制,被10mmol/LEDTA部分抑制,被1mmol/L L-半胱氨酸激活,并且可用4-甲基伞形酮乙酯作为底物,说明含芳香基酯酶。同时说明在3种非特异性酯酶中可能主要含芳香基酯酶。另外,在以β-月桂酸萘酯、丁酰胆碱和乙酰胆碱分别作底物时,血淋巴中也均具有酯酶活性,说明其内可能还含有脂肪酶、胆碱酯酶和乙酰胆碱酯酶。……   
[关键词]:栉孔扇贝;血淋巴;酯酶;酶活性
[文献类型]:会议论文
[文献出处]: 《中国海洋学会海洋生物工程2005年学术年会论文集2005年
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