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检测结核分枝杆菌rpoB基因突变的研究

钟敏;温博海;陈荣;王安客;蹇锐;王易伟

  目的建立聚合酶链反应-单链构象多态性(PcR-SSCP)检测结核分枝杆菌rpoB基因突变的方法,并评价其临床应用的价值。方法依据结核分枝杆菌rpoB基因的耐利福平决定区设计引物,用PCR从临床分离株和直接从痰标本中扩增rpoB基因片段;对扩得的rpoB基因片段做DNA SSCP分析,并随机测定rpoB片段的序列。结果PCR从所有212株结核分枝杆菌中均扩得230bP片段,135份抗酸染色阳性的痰标本中,有113份扩得阳性片段(83.7%)。在SSCP分析中,140份经L-J药敏试验检测为利福平耐受的结核分枝杆菌,有130份有rpoB基因突变(符合率为92.9%),72份经LJ药敏试验检测为利福平敏感的菌,有67份的rpoB基因无突变(符合率为93.1%)。测序分析发现57份经SSCP检测为突变的rpoB片段均有序列改变,10份经SSCP分析为无突变的有8份无序列改变,SSCP与测序结果的符合率为94.0%。在本研究的菌株中,耐多药结核病(MDR-TB)占76.4%(107/140),有92.5%(99/107)耐多药菌株经SSCP检测有rpoB突变。结论建立的PCR-SSCP分析方法,是一种较准确和稳定的检测结核分枝杆菌IpoB基因突变的方法,可用于临床快速分析患者结核分枝杆菌对利福平的耐药性,并可作为MDR-TB判断的一个重要指标。……