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体外诱导人骨髓间充质CD45~-HLA-DR~-细胞亚群向肝细胞样细胞分化

王晓;段芳龄;马军

  目的:观察成纤维细胞生长因子4(FGF-4)对培养的骨髓单个核细胞(BMMNCs) 和 CD45~-HLA-DR~-细胞的作用,寻找影响和调节 BMMNCs、CD45~-HLA-DR~-细胞向肝细胞样细胞定向分化的最佳条件,探讨体外诱导培养获取具有表型、功能和结构特征的肝细胞样细胞的可能性。方法:收集无血液疾患的健康人 BMMNCs,以5×10~5/ml 密度用成分 DMEM 培养液培养至细胞生长达对数生长期,用磁式细胞分离仪分选出 CD45~-HLA-DR~-细胞,加入到预铺纤维连接素的50ml 塑料培养瓶中诱导培养,接种密度均为3.0×10~5/ml。具体分组如下:A、对照组1:维持液+BMMNCs,B、维持液+BMMNCs+FGF-4(20ng/ml),C、对照组2:维持液+CD45~-HLA-DR~- 细胞,D、维持液+CD45~-HLA-DR~-细胞+FGF-4(20ng/ml)。分别于诱导培养的第3、8、15、 22、30天留取细胞,进行透射电镜检测、免疫细胞化学、糖原 PAS 染色,以及培养上清尿素氮功能检测。结果:B、D 两组第8天的细胞涂片均出现 AFP、CK19的表达,随着培养时间的延长,AFP、CK19的表达逐渐消失,而白蛋白、肝细胞抗原开始在胞浆内表达,在30 天的细胞涂片除 A、C 两组阴性表达外,余均出现白蛋白、肝细胞抗原的高表达。并且随着诱导时间的延长,B、D 两组产生尿素氮也逐渐增多,在22,30天时,出现糖原染色阳性, 而 A、C 两组阴性。透射电镜发现,人骨髓 CD45~-HLA-DR~-细胞内的结构从原始未分化状态逐步发育成幼稚状态,最终发育成类肝细胞结构。结论:FGF-4具有诱导人 BMMNCs、CD45~-HLA-DR~- 细胞向表达 AFP、CK19、白蛋白和肝细胞抗原的肝细胞样细胞分化的作用,这些细胞具有肝细胞结构特征。……