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复方甘草酸苷对暴发性肝衰竭保护作用的实验和临床研究

杨宝山

  目的:探讨暴发性肝衰竭的发病机理及复方甘草酸苷(SNMC)对暴发性肝衰竭的保护作用和可能机制。方法:(1)用D-氨基半乳糖和脂多糖腹腔注射构建暴发性肝衰竭(FHF)的小鼠模型。观察 SNMC 对小鼠实验性肝损伤各组血浆谷丙转氨酶(ALT)、白蛋白(ALB)、胆红素(TBIL)、肿瘤坏死因子-α(TNF—α)、一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、白细胞介素-6(IL-6)和肝脏病理情况及小鼠存活率的影响: 电镜下观察细胞超微结构的改变。(2)将昆明种小鼠70只随机分为 A,B,C 三组,分别为正常对照组 (5只)、模型组(5只)和 SNMC 保护组(60只),A 组和 B 组小鼠于给药后6 h 全部断颈处死,C 组于给药后6h,1d,3d,5d 和7d 各断颈处死5只,留取肝组织,应用末端转移酶标记技术(TUNEL)检测肝细胞原位凋亡的情况:应用免疫组化法分别检测肝组织中 Fas,Fas 配体(FasL)和天冬氨酸半光氨酸蛋白酶 -3(caspase-3)的表达。(3)选择2004年3月至2005年3月哈医大一、二院、黑龙江省医院、哈尔滨传染病院住院的暴发性肝衰竭病人(急性、亚急性重型肝炎),共86人。其中治疗组每天静脉注射 SNMC120ml, 同时常规保肝支持对症治疗,对照组则仅用保肝支持对症治疗。对比观察两组血浆谷丙转氨酶(ALT)、胆固醇(CHOL)、胆红素(TBIL)、凝血酶原活动度(PTA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、一氧化氮(NO)、白细胞介素-6(IL-6)的变化情况及病情转归。结果:(1)D-氨基半乳糖和脂多糖可以构建暴发性肝坏死模型,SNMC 大、中、小剂量组及不同给药时间组在降低酶学指标及血浆 TNF-α、NO、ET-1、IL-6水平,改善肝组织的损伤程度方面与模型组比较均有非常显著的差异(P<0.01)。SNMC 大、中、小剂量以小剂量较好,不同给药时间以同时给药较好,但不同剂量和不同给药时间之间无显著意义(P>0.05)。模型组和保护组之间的存活率有非常显著的差别(P<0.01)。电镜可见典型的肝细胞凋亡,表现随治疗时间的延长明显改善。(2)SNMC 治疗组随着 SNMC 治疗时间的延长,凋亡指数逐渐降低,由6h 的32.3%降至 7d 的5%(33.2±4.4 vs 26.6±4.7,t=4.1 P<0.01);Fas 及 caspase-3在 A 组有少量表达,FasL 未见表达。B 组 Fas,FasL 及 caspase-3、细胞色素 c 阳性表达细胞明显增加,C 组随治疗时间的延长,表达逐渐减少(80.1±11.3 vs 64.7±10.9,P<0.01:60.9±7.5vs43.1±7.8,P<0.01;84.0±5.5vs72.3 ±5.2,P<0.01;58.5±3.8vs46.3±5.5,P<0.01)。(3)SNMC 在降低酶学指标、改善肝功能情况及对有关炎症介质水平变化的影响方面,与对照组比较有非常显著的差异(p<0.01),且对病人的临床表现及病情转归亦有非常显著的作用(p<0.01)。结论:(1)SNMC 对小鼠暴发性肝衰竭有明显的保护作用,可改善 D-氨基半乳糖和脂多糖所致的肝细胞病理性凋亡及坏死,并抑制各种因素所介导的炎症反应,从而降低暴发性肝坏死的病死率。(2)肝细胞异常凋亡在小鼠暴发性肝衰竭的发病中具有重要作用,其机理可能是通过 Fas/FasL 系统活化所介导的肝细胞凋亡,细胞色素 c 和线粒体在肝细胞凋亡中也具有一定作用:同时也证明 SNMC 对抑制细胞凋亡有一定作用。(3)SNMC 对暴发性肝衰竭病人有明显的保护作用,并抑制各种因素所介导的炎症反应,从而减少或缓解肝坏死的并发症,降低病人的病死率。……