基础医学
利用CRISPR/Cas9系统建立斑马鱼Spag6基因敲除模型
2018-04-15
目的采用高效基因编辑系统CRISPR/Cas9对斑马鱼的精子相关抗原6(Spag6)基因进行编辑,建立Spag6基因敲除斑马鱼模型。方法针对斑马鱼Spag6基因,利用生物信息学选取靶位点,构建向导RNA(gRNA)表达载体并体外转录,将gRNA和Cas9mRNA混合物显微注射到斑马鱼单细胞期的受精卵中,24~48h提取基因组DNA,PCR扩增出目的片段,限制性酶切法初步检测基因打靶情况,最后进行测序分析确定编辑效果。结果取3个靶位点(S1、S2、S3)进行实验,选择gRNA浓度较高的S1和S3进行注射。限制性酶切及测序的结果显示S3已产生编辑效应。结论通过CRISPR/Cas9系统成功地获得Spag6基因编辑的突变体,为进一步探讨斑马鱼Spag6基因的体内功能奠定了基础。
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华中科技大学学报(医学版)
2018年02期
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