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生物学
扩增我国登革2型病毒全长cDNA分子的技术方法融合PCR方法
目的 :建立扩增登革 2型病毒基因组全长cDNA的融合PCR法 ,为深入探讨病毒基因组的结构与功能提供有效的技术途径。方法 :根据我国登革 2型病毒D2 4 3株序列设计引物 ,首先采用长链RT PCR技术扩增病毒基因组 5′及 3′半分子 ,然后以半分子采用融合PCR法将两个半分子构建成全长cDNA分子。为进一步证实所构建全长cDNA分子的特异性 ,再以融合PCR产物为模板扩增 5′非编码区序列 ,与pGEM T载体连接 ,在 377A型自动测序仪进行序列分析。结果 :通过对逆转录反应及PCR扩增条件的优化 ,建立了制备大片段cDNA及构建全长cDNA分子的融合PCR方法。扩增的我国登革 2型病毒的 5′及 3′半分子的长度均为 5kb左右 ,采用融合PCR方法制备的全长cDNA长约 11kb ,与预期大小一致 ,非编码区测序结果表明扩增产物为D2 4 3所特有。结论 :所建立的融合PCR方法是构建登革病毒基因组全长cDNA的有效技术
军事医学科学院院刊
2001年02期

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