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牛奶中残留的β-内酰胺酶的检测方法研究
目前,β-内酰胺酶作为抗生素分解剂已被非法应用到生产中。β-内酰胺酶可以分解牛乳中的抗生素残留使其降到允许量。但是目前为止,尚未有关于β-内酰胺酶本身及其分解产物对人体是否健康的安全性评价标准,所以国家规定生鲜牛乳中不得检出β-内酰胺酶。本论文主要是针对我国牛奶中存在抗生素分解剂残留,且检测体系不够完善的现象,建立了牛奶中β-内酰胺酶残留检测的微生物杯碟法和酸度计试验法,并对其进行了比较性研究,确定了不同检测方法的适宜检测条件,以便为不同规模的乳品企业以及质量监督部门提供理论依据和技术参考。 本文利用微生物杯碟法和灵敏酸度计法对牛乳中的β-内酰胺酶进行检测研究,旨在建立可行的检出限较低、检测时间较短的检测方法。 通过抑菌圈试验,首先对检测指示菌株进行选择,利用双层琼脂法进行检测用培养基的制备,得到适宜的检测用培养基为抗生素Ⅱ培养基。利用舒巴坦特异性抑制β-内酰胺酶的活性,并加入青霉素作为对照,通过比对加入β-内酰胺酶抑制剂与未加入抑制剂的样品所产生的抑菌圈的大小来确定样品中是否含有β-内酰胺酶。 结果得到对青霉素类药物绝对敏感的适宜标准菌株为藤黄微球菌,适宜的菌悬液浓度为1×10~9 CFU/mL,适宜的青霉素浓度为0.100 mg/mL,适宜的舒巴坦浓度为5μg/mL,阳性对照用β-内酰胺酶的适宜浓度为400 U/mL,得到检出限为4 U/mL,检测所需时间为14~16 h。 利用微生物杯碟法对市售牛奶中残留的β-内酰胺酶进行检测,抽取四个厂家的31个产品,得到在系统结果成立条件下, 18个(58.1%)样品检测结果为阳性。 利用酸度计法进行牛奶中残留的β-内酰胺酶快速检测方法的研究,利用β-内酰胺酶分解青霉素产酸使牛奶pH值下降的原理,通过单因素试验和正交试验得到适宜的酶促反应条件为:温度33℃、青霉素底物质量浓度10 mg/mL,检测时间仅为60 min。此方法对液态纯牛奶中β-内酰胺酶的最低检出限为8.92 U/mL。 利用酸度计法对市售牛奶中残留的β-内酰胺酶进行检测,抽取三个厂家的12个产品, 5个(41.6%)样品检测结果为阳性。 通过研究得出,两者都可作为牛乳中残留的β-内酰胺酶的检测方法,比较得出微生物法的检出限低,但时间较长,酸度计法的检出时间较短,但检出限高,可作为快速检测方法的一种,为今后更快更准确的检测牛乳中的β-内酰胺酶奠定了基础。
硕士论文
《河北农业大学》 2011年硕士论文

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