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畜牧与动物医学
磺胺-5-甲氧嘧啶残留酶联免疫分析试剂盒的研制
磺胺类药物是兽医临床上使用最广的一类化学合成抗菌药,主要用于细菌感染性疾病和某些原虫病的预防和治疗。由于不合理使用药物,导致磺胺类药物在可食用动物组织中的残留,最终对食品安全和人类健康造成危害。 许多国家已经规定磺胺药在人类食用组织中的残留限量为0.1mg/kg,有些甚至不得检出。检测磺胺类药物残留经常采用色谱分析方法和酶免疫测定法。色谱法虽然十分灵敏、准确,但样品前处理繁琐、检测时间长、耗资大、技术性要求高,且要有昂贵的仪器,不适合大量样品的筛选测定。酶免疫测定法因其快速、灵敏、高效正越来越受到欢迎。用ELISA原理制成试剂盒,可以更方便地为实际应用。酶免疫法应是将来用于药物残留检测的主流方法,是将来残留检测的发展趋势。 本研究通过抗原的合成和抗体的制备,通过ELISA测定方法,检测了实验条件下鸡体内SMD的残留变化。 复苏冻存的单克隆抗体细胞株,用有限稀释法将细胞进行克隆。最终产生了六株稳定分泌针对SMD抗体的细胞:B6、D12、E2、H5、G8、G11。将H5细胞注入小鼠的腹腔,制备出腹水。 制备的腹水同人工抗原作方阵实验,确定抗原、抗体的工作浓度为1:5000和1:100000。 通过对鸡进行药物实验,完善了样品前处理方法,测定了鸡体内SMD的残留。 改进了ELISA的底物显色系统,本实验采用TMB显色系统,并确定了TMB和过氧化氢尿素的最终工作浓度。 按试剂盒的要求对试剂盒中的各种试剂的保存方法、条件、时间等进行大量实验,结果显示:保存在甘油中的SMD单克隆抗体,六个月后效价未下降,且仍有很好的线性关系,不论是在4℃、-20℃或稀释倍数较大时,都可以长时间进行保存。显色系统在4℃能保存的时间为3个月。我们能够初步组装磺胺-5-甲氧嘧啶酶联免疫快速检测试剂盒。
硕士论文
《扬州大学》 2006年硕士论文

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