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畜牧与动物医学
山豆根多糖提取工艺及免疫学活性研究
山豆根为我国传统中药,具有多方面的药理作用和生物活性。本论文进行了山豆根多糖(SSP)的分离提取,优化了提取工艺路线,制定出了山豆根多糖原料药质量标准,并通过实验研究探讨了山豆根多糖的药理活性及其作用机制。主要研究内容如下: 微波提取法确定山豆根粗多糖的最佳提取条件为:料液比1:15,提取温度90℃,提取时间90 min,上述条件下山豆根粗多糖得率为5.54%,总糖含量为65.41%,精制后的多糖中总糖含量达88.48%。质量标准方面,单糖含量、干燥失重、重金属含量、蛋白质含量等均符合《中华人民共和国药典》规定,精制后的多糖采用红外光谱扫描表现出多糖的特征吸收峰。观察了不同剂量的山豆根多糖对小鼠免疫器官组织中自由基及自由基产生酶活性的影响,探讨了山豆根多糖的自由基药理作用及抗氧化作用。利用地塞米松(Dex)建立免疫抑制模型,观察了山豆根多糖对免疫功能低下小鼠血清溶菌酶(LZM),白介素-6(IL-6),白介素-10(IL-10),白介素-12(IL-12),干扰素-γ(IFN-γ)含量的影响。采用体外培养小鼠脾脏淋巴细胞的方法,观察了山豆根多糖对小鼠脾脏淋巴细胞分泌白介素-4(IL-4)和干扰素-γ(IFN-γ)的影响。观察了不同剂量的山豆根多糖对鸡脾脏淋巴细胞内环磷酸腺苷和环磷酸鸟苷(cAMP/cGMP)水平及分泌6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)、血栓素B2(TXB2)和一氧化氮(NO)的影响,探讨山豆根多糖对鸡免疫细胞信号转导相关分子的调节作用。以不同剂量的山豆根多糖给鸡一次性胸部肌肉注射,观察了不同时间段鸡体内活性氧水平及抗氧化能力。 结果表明:地塞米松按剂量1.25 mg/kg体重于1d、3d、5d皮下注射能引起小鼠免疫功能显著下降,复制出免疫功能低下模型。山豆根多糖能拮抗由地塞米松所引起的小鼠脾脏指数的下降,增强机体免疫功能;山豆根多糖通过提高机体免疫器官抑制羟自由基能力,降低髓过氧化物酶活性、抑制黄嘌呤氧化酶的活性等途径来影响机体内活性氧自由基的产生与消除,并通过升高还原型谷胱甘肽水平、增强谷胱甘肽过氧化物酶活性而调节机体的氧化还原平衡。山豆根多糖能够增加小鼠血清中溶菌酶的含量,增强机体的抗菌能力,通过调节白IL-6、IL-10和IL-12来影响机体的免疫功能。山豆根多糖对体外培养的小鼠脾脏淋巴细胞产生的细胞因子IL-4及IFN-γ的含量无显著影响,故其对Thl/Th2细胞之间的免疫平衡影响不显著,但在有ConA存在的条件下,山豆根多糖可协同ConA使IFN-γ含量显著上升,使得Thl/Th2增加,从而增强机体的细胞免疫反应和抗病毒活性,达到免疫调节的作用。山豆根多糖在体外能显著升高鸡脾脏淋巴细胞内cAMP水平、促进6-keto-PGF1α和TXB2分泌,调节鸡脾脏淋巴细胞cAMP/cGMP和6-keto-PGF1α/TXB2信号体系。山豆根多糖对鸡胸腺指数、脾脏指数、法氏囊指数均有升高作用,并通过调节机体总抗氧化能力、超氧化物歧化酶活力、还原型谷胱甘肽和一氧化氮的水平从而影响鸡的抗氧化能力和免疫功能。 结论 (1)山豆根多糖提取方法以微波法较好,最适条件为料液比1:15,提取温度90℃,提取时间90 min。建立了山豆根多糖的质量标准。 (2)山豆根多糖通过影响小鼠体内活性氧水平及其相关酶的活性,调节机体的抗氧化能力。 (3)山豆根多糖通过升高小鼠血清中溶菌酶的水平,调节淋巴因子水平影响机体的免疫功能。 (4)山豆根多糖协同ConA使IFN-γ含量显著上升,从而增强机体的细胞免疫反应活性。 (5)山豆根多糖通过影响免疫细胞内的信号转导分子cAMP、cGMP、6-keto- PGF1α、TXB2而调节机体的免疫功能。 (6)山豆根多糖对鸡体内抗氧化能力具有调节作用。
博士论文
《甘肃农业大学》 2010年博士论文

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