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农作物
EUI2(t)基因的功能互补验证及RNAi分析
通过辐射诱变获得使水稻穗颈节间伸长的新基因eui2(t),朱宏波(2003)对该基因进行了精细定位继而实现了图位克隆;通过4个不同来源的eui2(t)突变体都在同一基因的外显子区域发生碱基缺失而推断出候选基因。本研究在此基础上,利用农杆菌介导的遗传转化对候选基因进行功能互补验证和RNAi分析。 主要结果如下: 1、构建了EUI2(t)基因植物表达载体pCAMBIA1301-EUI2,转化协青早eB2与中花14杂交后代F_2和F_3长穗颈个体的幼胚诱导的愈伤组织。共转化愈伤组织块6597个,获得抗性愈伤380个,平均转化率5.76%;分化得到109个T_0代转化株系,平均分化率为28.68%。对12个转基因系的23个单株的PCR检测表明,EUI2(t)基因的候选基因都整合到了水稻基因组中。形态检测表明,只有37-1和82-3是穗颈节间缩短的转基因阳性植株;其自交后代群体呈现短穗颈和长穗颈的分离,分别是37∶12和38∶10。 2、构建了EUI2(t)基因的RNAi植物表达载体pCAMBIA1301-EUI2-ihpRNAi,利用农杆菌介导转化中花11和明恢86幼胚诱导的愈伤组织。其中转化明恢86的材料共感染愈伤组织1304个,获得抗性愈伤34个,平均转化率2.60%;分化得到5个T_0代再生转基因系,平均分化率为14.70%,但没有得到穗颈节间伸长的转基因阳性植株。转中花11的材料共获得12个转基因系,55个成活植株,发现1个穗颈节间显著伸长的转基因系。 本研究成功实现了候选基因的遗传转化,证明了EUI2(t)的功能与水稻最上节间的伸长有关,验证了候选EUI2(t)基因为克隆的目的基因。
机 构:
领 域:
硕士论文
《福建农林大学》 2005年硕士论文

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