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水产和渔业
效应物对锯缘青蟹N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的抑制作用研究
以青蟹内脏为材料,分离提纯N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase),获得比活力为7,990 U/mg的PAGE和SDS-PAGE电泳单一纯的酶制剂。本文以此酶制剂为对象展开以下几方面的研究。 (1)金属离子对酶活力的影响:结果表明,一价金属离子中的Li~+、Na~+和K~+对酶活力没有明显影响,而Ag+对该酶有较强的抑制作用(IC_(50)为2.32 mmol/L)。二价金属离子中Mg~(2+)、Ca~(2+)、Ba~(2+)、Co~(2+)和Mn~(2+)对该酶都有激活作用,其中Mg~(2+)、Ca~(2+)和Ba~(2+)的激活作用较强,其强度依次为Ca~(2+) >Ba~(2+) >Mg~(2+),而Mn~(2+)对酶仅有轻微的激活作用,Co~(2+)对酶的效应则是先激活后抑制。Cd~(2+)、Pb~(2+)和Hg~(2+)对该酶有不同程度的抑制作用,Cd~(2+)和Pb~(2+)对酶的抑制表现为可逆过程,Cd~(2+)和Pb~(2+)对酶的抑制作用属于混合型,Cd~(2+)的抑制常数KI和KIS分别为23.9和5.0 mmol/L,Pb~(2+)的抑制常数KI和KIS分别为0.70和6.22 mmol/L。Hg~(2+)对酶的抑制作用是不可逆的。应用荧光发射光谱研究Pb~(2+)和Hg~(2+)对酶分子构象的影响,比较酶构象与酶活力的关系,发现Pb~(2+)、Hg~(2+)使酶活力的变化快于构象的变化。采用邹氏方法研究Pb~(2+)对酶的抑制作用动力学,建立动力学模型,测定抑制剂与游离酶(E)和酶-底物络合物(ES)结合的微观速度常数,并加以比较,表明底物对酶的抑制作用有明显的保护作用。三价金属离子Al~(3+)、Fe~(3+)对该酶均表现为可逆的抑制作用,Fe~(3+)对酶的抑制作用属于混合型,Fe~(3+)的抑制常数KI和KIS分别为395.5和135.6μmol/L。 (2)有机溶剂对酶的效应:酶在醇类、醛类、酮类、甲酰胺类等有机溶剂中均表现为可逆的抑制作用。醇类物质中甲醇、乙醇、乙二醇、丙二醇和丙三醇对酶的抑制作用属于竞争性(KI分别为1.20、0.49、1.69、1.32、1.27 mol/L)。醛类物质中甲醛对酶的抑制为非竞争性抑制(KI为0.608 mol/L),而苯甲醛对酶的抑制属于竞争性(KI为0.012 mol/L),进一步研究甲醛对酶的失活作用动力学,建立了动力学模型,测定抑制剂与游离酶(E)和酶-底物络合物(ES)结合的微观速度常数,表明在甲醛存在下,底物对酶的抑制作用有明显的保护作用。酮类物质中丙酮对酶产生混合型抑制(KI和KIS分别为0.406和1.049 mol/L),而环己酮对酶的抑制属于竞争性(KI为1.33 mol/L),应用荧光发射光谱研究丙酮对酶分子构象的影响,结果显示丙酮对酶分子构象有显著的影响。甲酰胺物质中甲酰胺对酶的抑
硕士论文
《厦门大学》 2006年硕士论文

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