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呼吸系统疾病
肺纤维化的发生机制及其早期防治研究
成纤维细胞活化、增殖及大量细胞外基质聚集是肺纤维化的主要病变特征,多种因素均可引起肺纤维化如职业性粉尘(SiO_2等)、病毒(冠状病毒等)、放射性损伤及某些药物(博莱霉素等),此外还有一类不明病因的肺纤维化—特发性肺纤维化。虽然起因不同但纤维化的发展与结局基本相似,目前肺纤维化发生的确切机制尚不清楚,早期有效防治亦未获得突破性进展。本课题在细胞和动物两个水平上进行试验,并通过γ射线和博莱霉素诱导两种方法建立肺纤维化动物模型,深入探讨肺纤维化发生机制及观察牛磺酸、L-精氨酸、IBE5和重组中国人γ-干扰素对肺纤维化的防治作用。 将培养的人肺成纤维细胞分为正常组、单纯照射组、不同剂量给药组(Tau、Arg或IBE5 0.1、1、10ug.ml~(-1)或γ-INF 0.05、0.1、0.5、lug/ml),进行MTT、免疫细胞化学后的图像定量分析。将雄性C57小鼠26只随机分为四组:正常组、单纯照射组、Tau组、Arg组,两防治组分别在照射前三天给药,其方式为自由饮水持续2m,药物浓度均为10g.ml~(-1),分别于照射后第1、3、6m取材;将42只C57小鼠随机分为5组:正常对照,BLM、IBE5小剂量(0.025 g.kg~(-1).d~(-1))、IBE5中剂量(0.05 g.kg~(-1).d~(-1))、IBE5大剂量(0.1g.kg~(-1).d~(-1)),IBE5用1%羧甲基纤维素钠溶解后灌胃给药,给予IBE5后第4天经气管内注入BLM,IBE5给药持续30d,届时取材;雄性C57小鼠50只,随机分为五组即正常对照组、BLM组、INF-γ小剂量组(0.25 ug.d~(-1))、中剂量组(0.5 ug.d~(-1))、大剂量组(1.0ug.d~(-1)),给药组于建模前3d经皮下给予INF-γ,持续35d,届时取材。左肺匀浆测Hyp,右肺制成组织切片行HE、苦味酸天狼星红染色和免疫组织化学后光镜观察及图像定量分析。 细胞试验结果表明,牛磺酸、L-精氨酸、IBE5和重组中国人γ-干扰素均可抑制γ射线刺激人肺成纤维细胞的异常增殖,并且均可降低细胞对α—SMA和MMP-7表达。我们在动物试验中,成功地复制了两种肺纤维化小鼠模型。通过HE和天狼猩红染色后光镜观察和图像分析发现,早期为间质性肺炎,后期为肺纤维化且有大量胶原产生。 给予牛磺酸、L-精氨酸、IBE5和重组中国人γ-干扰素四种药后,肺纤维化均得到 硕士论文 肺纤维化的发生机制及早期防治研究 不同程度抑制。Q一SMA在正常肺组织中仅在较大血管、支气管壁的平滑肌层表达;枷P一7、 MMP一9只表达于支气管粘膜上皮细胞。纤维化模型的肺组织中,Q一SMA表达增加,主要 位于纤维化区域内的肌成纤维细胞中,尤其是血管、支气管旁;姗P一7与纤维化严重程 度成正比,其免疫组织化学显示支气管上皮细胞、巨噬细胞和肌成纤维细胞呈阳性; 枷P一9主要表达于炎症细胞。牛磺酸、L一精氨酸和IBES均可显著降低Q一S撇和MMP一7 表达,对MMP一9无明显影响;重组中国人Y一干扰素对。一S琳、枷P一7和MMP一9均有明显 抑制作用。 通过以上试验,我们认为:1.肌成纤维细胞的持续存在是肺发生纤维化的关键因素 之一。2,MMP一7在肺纤维化的发生发展过程中参与了肺结构破坏和重塑。3.炎症不是肺 纤维化的主要原因,只是伴发症状,而肺间质Fb和平滑肌细胞进行性增生,肺组织结 构的持续性重构,导致肺纤维化的发生。4.牛磺酸和L一精氨酸通过抑制Fb的增殖和降 低MMP一7的分泌来减轻肺纤维化的严重程度。5.IBES通过①抑制Fb的活化、增殖,降 低了Fb向MFB的转化率②抑制了肺内细胞对MMP一7的表达,阻断肺间质Fb和平滑肌细 胞进行性增生,进而阻断肺组织结构的持续性重构两条途径实现防治肺纤维化。6.重组 中国人Y一干扰素有效防治肺纤维化的作用机制可能包括:①抑制Fb的活化、增殖、降 低Fb向MFB的转化率,抑制胶原的合成。②抑制肺内细胞MMp一7的表达③调节机体免 疫力,提高抗感染能力,抑制MMP一9的表达,阻断内皮细胞、炎症细胞的迁移,从而抑 制肺组织的重构。
机 构:
领 域:
关键词:
硕士论文
《延边大学》 2004年硕士论文

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