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畜牧与动物医学
抗磺胺药抗体的制备与免疫分析法的研究
磺胺类药物是一类重要的具有广谱抗菌作用的药物,主要用于预防和治疗细菌感染性疾病,也常做为饲料添加剂促进动物生长,但不合理的使用造成在动物性食品中残留,可能对人类的健康造成潜在危害。为了建立快速灵敏的检测磺胺药残留免疫分析方法,本研究制备了三种磺胺药(SDM、SN、SMX)抗体,并对其特性和应用进行研究,主要研究内容和结果包括以下几方面: 1.采用杂交瘤技术制备了针对磺胺甲噁唑(SMX)的单克隆抗体。通过鉴定单抗为IgG_1亚型,效价为1:10~5,抗体亲和常数为2.3×10~8L/mol,分子量为162000dalton,抗体对三种有机溶剂甲醇、乙腈和丙酮均有很好的耐受性,与其他磺胺药无交叉反应,结果表明抗体是特异性的。ELISA测定游离磺胺甲噁唑,建立的标准曲线在10pg/ml~10ng/ml之间呈良好的线性关系,线性回归方程为Y=8.91+19.67857X,50%抑制率时检测限为0.82ng/ml,添加回收率在90%以上。 2.合成磺胺甲嗯唑全抗原,免疫动物制备了多克隆抗体,ELISA测定表明抗体具有特异性。采用酶标记抗体或抗原方法,对抗原直接、抗体抑制和双抗夹心三种ELISA方法筛选,选择了双抗夹心法为试剂盒的检测方法,进一步优化试剂盒的各项条件,组装的试剂盒检测样品效果较好,其检测范围为1ng/ml~100μg/ml,灵敏度为20.91ng/ml,板内和板间变异系数分别为2.51%和4.97%,方法的线性关系良好。实际样品测试结果表明试剂盒可用于动物性食品中磺胺药残留的检测。 3.合成磺胺地索辛(SDM)全抗原,免疫动物制备了多克隆抗体,ELISA测定表明抗体具有特异性。多抗与温敏水凝胶聚合为pNIPA-Ab,荧光标记抗原,通过游离SDM与荧光标记的抗原竞争有限量的pNIPA-Ab,建立控温相分离免疫分析SDM的方法,测定SDM的线性范围为1ng/ml~100μg/ml,50%抑制率时检测限是0.64μg/ml,添加回收率在90%以上。结果表明控温相分离免疫分析SDM,可满足对样品的测定。 4.合成氨苯磺胺(SN)全抗原,免疫动物制备了多克隆抗体,ELISA测定表明抗体具有特异性。多抗与温敏水凝胶聚合为pNIPA-Ab,荧光标记抗原,游离SN与荧光标记的抗原竞争有限量的pNIPA-Ab,建立控温相分离免疫分析测定SN的方法,测定SN的线性范围为1ng/ml~100μg/ml,50%抑制率时检测限为60.45ng/ml。结果表明控温相分离免疫分析SN,可满足对样品的检测。
博士论文
《中国农业大学》 2005年博士论文

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