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中药学
已上市中药安全性再评价的价值——华蟾素注射液心脏毒性初探
目的:华蟾素注射液作为新型的中药注射剂,是我国自行研制的二类新药。其在临床已使用40多年且应用广泛。由于其为具有心脏毒性的蟾蜍全皮提取制剂,且有心血管不良反应的临床报道。故而本试验的目的为评价华蟾素注射液的心脏毒性及可能的机制。方法:本试验分为体内和体外两部分。体内试验又分为犬安全药理遥测试验和大鼠重复给药毒性试验。体外试验又分为实时细胞分析、动作电位和离子通道试验。体内试验:犬安全药理遥测试验:4只Beagle犬按4×4拉丁方设计,第I-IV阶段4个供试品剂量水平分别为0,0.3,1,3 (生药)g/kg,第V阶段同时给予供试品最高剂量3 (生药)g/kg和强心苷拮抗剂苯妥英钠400 mg/kg。试验期间还监测心肌损伤指标(心肌钙蛋白I(Ctn-I)、肌酸磷化脢-同功脢MB(CK-MB)、天冬氨酸转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、C反应蛋白(CRP))。大鼠重复给药毒性试验:SD大鼠每天一次连续二周尾静脉注射给予华蟾素注射液。设3个组,包括溶媒对照组(0(生药)/kg)和供试品低、高剂量组(剂量分别为1和5g(生药)/kg),给药容量为10m L/kg。试验每组20只动物,雌雄各半。停药后解剖部分动物,剩余存活动物进入恢复期二周。试验期间还对以下指标进行观察或检测:死亡和濒死情况、临床征状、体重、摄食量、血液学和凝血指标、血清生化学指标、尿液分析、心肌损伤指标(心肌钙蛋白I(Ctn-I)、肌酸磷化脢-同功脢MB(CK-MB)、天冬氨酸转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、C反应蛋白(CRP))、大体解剖、脏器重量以及组织病理学检查。试验期间还对以下指标进行观察或检测:死亡和濒死情况、临床征状、体重、摄食量、追加大鼠重复给药毒性试验:SD大鼠每天一次连续一周尾静脉注射给予华蟾素注射液。设2个组,包括溶媒对照组(0(生药)/kg)和供试品高剂量组(剂量分别为10 g(生药)/kg),给药容量为20 mL/kg。试验每组10只动物,雌雄各半。停药后解剖。心肌损伤指标(心肌钙蛋白I(Ctn-I)、肌酸磷化脢-同功脢MB(CK-MB)、天冬氨酸转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、C反应蛋白(CRP))、大体解剖、脏器重量以及组织病理学检查。体外试验:实时细胞分析:应用xCELLigence实时细胞分析系统分析蟾毒灵(0.01~0.6μmol/L)对人类胚胎干细胞来源的心肌细胞(hESC-CM)搏动幅度和频率的影响。动作电位:利用全细胞膜片钳技术研究蟾毒灵(0.03~0.3μmol/L)对诱导型人多能干细胞分化的心肌细胞(hi PSC-CMs)动作电位的影响。离子通道:利用全细胞膜片钳技术研究0.8-100μmol/L蟾毒灵对离子通道[分别为INCX、Nav1.5 (INa)、Nav1.5-late (INa,Late)、Cav1.2 (ICa,L)、Kv4.3+KCh IP2 (Ito)、hERG (Ikr)、KCNQ1+KCNE1 (IKs)和Kir2.1(IK1)]的影响。结果:体内试验:犬安全药理遥测试验:3(生药)g/kg华蟾素注射液在给药后十五分钟内能够导致Beagle犬心电图的显著改变,随后逐渐恢复。与对照组或给药前相比心肌钙蛋白I(Ctn-I)、肌酸磷化脢-同功脢MB(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)明显改变,且其中心肌钙蛋白I(Ctn-I)改变的幅度最大;大鼠重复给药毒性试验:未见给药相关毒性。追加大鼠重复给药毒性试验:10 g(生药)/kg仅见心肌钙蛋白I(Ctn-I)明显改变,未见其他异常。体外试验:实时细胞分析:结果显示浓度在低于0.1μmol/L时蟾毒灵能够增强心肌细胞的搏动幅度,也能增加心肌细胞的搏动频率,而在高于0.3μmol/L时蟾毒灵能够抑制心肌细胞的跳动;动作电位:0.03~0.3μmol/L降低动作电位时程和最大去极化速率,还可以降低动作电位振幅和静息膜电位。搏动状态结果与实施细胞分析试验结果相似;离子通道:蟾毒灵对ICa,L、Ito、Ikr、IKs、IK1通道没有显著性影响,而对INCX、INa、INa,Late具有显著性影响。结论:在本试验条件下,华蟾素注射液具有心脏毒性,其物质基础为蟾毒灵等强行苷类似物。其心脏毒性的机制之一为对晚钠通道的激活作用,另外心肌钙蛋白I(Ctn-I)可以作为具有临床意义的监控指标。
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2019中国中西医结合学会临床药理与毒理专业委员会第三届学术研讨会论文摘要集
2019年

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