药学
人工骨材料的体外细胞毒性试验
探讨胶原/羟基磷灰石一骨形态发生蛋白复合材料体外的体外成骨细胞黏附和生长作用。方法:取自愿引产3-4月胚龄颅骨软组织(伦理委员会审议)进行传代细胞培养,将HA、CHA、HA-BMP、CHA-BMP材料制备成8×2mm园片试样,高压灭菌后,分别植入6孔培养板中,每孔放置相同样品5块,按每片材料接种1×104个成骨细胞于样品材料表面,分别加DMEM培养液,设空白对照。将培养板置于37℃,5%C02二氧化碳培养箱培养,分别1,3,6,9天取实验材料及细胞冻溶液观察细胞形态及功能变化。通过显微镜和扫描电镜观察细胞生长、聚集及材料表面吸附状况。结果:接种24小时后HA、CHA和BMP复合材料边缘均可见细胞附着,瓶壁上有散在的单个或多个细胞群,细胞呈三角形,短梭形和园形,随培养时间延长,材料边缘及瓶壁上附着的细胞逐渐增加,BMP处理材料细胞附着密度增加相对明显,CHA-BMP材料细胞密度较高,各组细胞形态与对照组比基本相似,细胞生长良好。采用体外成骨细胞培养的MTT法测定结果发现经BMP处理材料组OD值明显高于相应非处理材料组,两者之间存在显著性差异(P<0.05)。不同材料OD值分析显示CHA-BMP组高于HA-BMP、CHA组高于HA,BMP处理明显高于空白组(p<0.01),随培养时间的延长细胞数量有所增加,到第6天达到最高峰。采用ELAS法测定结果 ,OC值显示BMP处理后材料组明显高于相应的非处理材料组(P<0.01),初期CHA-BMP材料组明显高于其他材料组,随时间延长HA-BMP材料均有上升趋势,CHA明显高于HA及对照组(P<0.05)。采用速率法测定ALP显示BMP处理材料组浓度明显高于相应的非处理材料组及空白对照组(P<0.05),随时间的延长均有上升,HA-BMP浓度最高。结论:本实验发现BMP复合材料表面细胞密度、细胞增殖率OC及ALP值明显高于相应的对照材料及对照组。通过对上述材料体外骨细胞培养,表明了不同材料细胞生长与代谢、异位成骨及骨修复能力有所不同,证明了体外与体内实验的相关性,显示了不同材料结构、强度、降解、离子释放对骨细胞生长及细胞外基质释放的影响。
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2016年第六届全国药物毒理学年会论文集
2016年
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