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生物学
极低密度脂蛋白受体的基因表达调控序列探讨
极低密度脂蛋白受体(VLDLR)是低密度脂蛋白受体(LDLR)超家族的成员,主要结合含apoE的脂蛋白,如VLDL、β-VLDL等富含甘油三酯的脂蛋白(TRL),参与甘油三酯(TG)的代谢。近年来的研究发现,TG是动脉粥样硬化(AS)的独立危险因子。因此TRL和VLDLR可能在AS的发生、发展过程中有重要意义。本文利用定点诱变的方法获得了VLDL受体基因上游调控序列的两个突变体即:1.2Kb的VLDL受体基因上游调控序列和0.6Kb的VLDL受体基因上游调控序列。突变体经酶切鉴定及Sanger双脱氧法测序,和预期结果相符。然后,利用分子克隆的方法构建了用1.2Kb的VLDL受体基因上游调控序列和0.6Kb的VLDL受体基因上游调控序列直接调控报告基luciferase的表达载体,经酶切,测序鉴定分析与预期结果一致。利用Lipofectamine~(TM)Reagent介导的基因转染方法将pGL4.2,pGL1.2,pGL0.6导入巨噬细胞系RAW264.7,通过生物发光来检测启动子的效率。经报告基因活性分析4.2Kb,0.6Kb和1.2kb的VLDL受体基因上游调控序列均可调控荧光素酶报告基因的表达。突变体1.2kb的VLDL受体基因上游调控序列对荧光素酶报告基因的调控能力比野生型4.2Kb的VLDL受体基因上游调控序列增高了36%,而突变体0.6Kb VLDL受体基因上游调控序列对荧光素酶报告基因的调控能力下降了40%。。当我们用VLDL孵育转染了pGL4.2,pGL1.2,pGL0.6的巨噬细胞系RAW264.7细胞时荧光素酶活性增强,这反应了VLDL能够调控荧光素酶报告基因的表达和VLDL受体基因的表达。为什么VLDL能够诱导荧光素酶报告基因的表达,这可能涉及到VLDL受体基因表达的信号转导,其具体的作用机制或信号传递途径有待于进一步的研究。尽管VLDL受体基因上游调控序列对荧光素酶报告基因和VLDL受体基因的调控性质是完全一致的,但荧光素酶报告基因和VLDL受体基因在细胞中的效应是完全不同的,为此我们进一步构建了用1.2Kb的VLDL受体基因上游调控序列直接调控VLDL受体基因的表达载体,经酶切,测序鉴定分析与预期结果完全一致。进一步用于研究VLDL受体基因表达的不同结果与细胞效应之间的关系,以及VLDL受体基因表达的不同结果与AS的发病机制的关系。本研究获得了含有C/EBP element,Inverted CCAAT box的0.6Kb和1.2kb的VLDL受体基因上游调控序列突变体。1.2kb的VLDL受体基因上游调控序列对荧光素酶报告基因的调控能力比野生型4.2Kb的VLDL受体基因上游调控序列增高了36%。VLDL能够调控VLDL受体基因4.2、1.2Kb、0.6KbVLDL受体基因上游调控序列。经我们的研究表明:有效的调控序列位于-1.2Kb至-0.6Kb之间。这就在前人研究的基础上进一步明确了反式作用因子的精确调控,为进一步研究序列定位提供了极有意义的依据和成果。本研究建立了VLDL受体基因上游调控序列直接调控报告基因Luciferase的分子模型和细胞模型,同时也建立了VLDL受体基因上游调控序列直接调控VLDL受体基因的分子模型和细胞模型。。
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湖北省暨武汉市生物化学与分子生物学学会第七届第十四次学术年会论文摘要集
2003年

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