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生物学
酸诱导肌酸激酶去折叠研究
现代电喷雾离子化-飞行时间质谱技术由于其超微量、快速和灵敏等特点已在蛋白质及多肽非共价相互作用的研究中获得了极大的成功,但该法应用于研究蛋白质去折叠还不多见。我们运用电喷雾离子化-飞行时间质谱技术结合等温滴定量热法、荧光光谱和戊二醛交联SDS-PAGE电泳等方法研究了酸诱导肌酸激酶的去折叠。质谱实验表明,肌酸激酶的去折叠程度随着酸的加入(pH 7.0-3.0)而逐渐增大。pH为7.0时该酶为二聚体(天然态),在pH 6.7至5.0间为二聚体和部分折叠单体(中间态)的平衡混合物,在pH 5.0至3.0间成为部分折叠单体和去折叠的单体(去折叠态)的平衡混合物,当pH降至3.0时肌酸激酶完全解聚为去折叠的单体,此时该酶达到完全去折叠状态。利用荧光相图法观察到了pH 7.0-5.2和5.2-3.0间肌酸激酶分别从天然态向中间态和从中间态到去折叠态的结构变化。利用等温滴定量热法测定了15.0、25.0、30.0和37.0℃时酸诱导肌酸激酶形成去折叠态的本征摩尔构象变化焓,该去折叠过程的摩尔恒压热容为很大的正值(8.78 kcal mol~(-1)K~(-1)),这表明疏水相互作用是维持肌酸激酶天然结构的主要作用力。四种方法得到的实验结果清楚表明,肌酸激酶的酸变性过程符合“三态模型”,而且其中间态为部分折叠的单体。
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湖北省暨武汉市生物化学与分子生物学学会第七届第十四次学术年会论文摘要集
2003年

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