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苹果半矮化砧木‘G.935’的组织培养及离体叶片不定芽再生
苹果半矮化砧木‘G.935’是从‘Ottawa 3’בRobusta 5’杂交后代中选出,早实,丰产性好,树体略大于‘M26’,抗寒抗火疫病,有可能替代‘M26’。该砧木在中国的适应性和田间性状表现需要试验评价。离体叶片不定梢再生,既可以用于无性繁殖,也是体细胞诱变和外源基因转化技术改良品种的基础。建立‘G.935’组培快繁技术体系,可为试验和生产快速提供优良苗木。建立离体叶片不定梢再生技术体系,可为利用生物技术改良品种奠定技术基础。材料取自‘G.935’嫁接生长的大树,剪取半木质化枝条,去叶片,剪成一芽一段的茎段,按常规杀菌流程对外植体进行杀菌,把茎段植入装有芽启动培养基1/2MS+1 mg·L~(-1) BA+0.2 mg·L~(-1)IBA+1 mg·L~(-1) GA的试管内,每管1个茎段。置光照周期为16 h·d~(-1)的光培养条件下培养28 d,腋芽萌发获得伸长生长的无菌绿苗,用作进一步试验。以腋芽萌发获得的无菌苗为试材,转移到继代增殖培养基上进行增殖培养。增殖培养基为分别添加0.5 mg·L~(-1) BA+0.2 mg·L~(-1) IBA、0.5 mg·L~(-1) BA+0.1 mg·L~(-1) TDZ+0.2 mg·L~(-1) IBA及1 mg·L~(-1)BA+0.2 mg·L~(-1) IBA的MS培养基,共计3个处理。每一继代周期为28 d,继代培养3次,观察生长表现并记录每个周期的增殖梢数,3次继代增殖梢数的平均值作为一个继代周期的增殖倍数。以刚展开的幼嫩叶片为外植体,用无菌刀片垂直于叶片中脉横切伤,把叶片接种于不定芽诱导培养基[基本培养基为MS和1/2MS,BA(2、4、6 mg·L~(-1))、TDZ(0.3、0.5、1 mg·L~(-1)),共12种处理,每种处理都添加0.3 mg·L~(-1) IBA和蔗糖30 g·L~(-1)]。叶片接种后先暗培养28 d,然后转入光周期为16 h·d~(-1)的光培养条件下培养。培养到42 d,观察统计不定芽再生率。在芽启动培养基上,茎段腋芽萌发率达80%以上,成功建立了‘G.935’无菌试管苗。试管苗最佳继代增殖培养基为添加0.5 mg·L~(-1) BA的MS培养基,绿苗既有良好的增殖又有良好的伸长,生长健壮。在添加较高浓度1 mg·L~(-1) BA培养基上,虽然也表现增殖和伸长生长良好,但苗玻璃化严重,玻璃化率高达50%以上。在添加0.5 mg·L~(-1) BA和0.1 mg·L~(-1) TDZ培养基上,绿苗增殖产生丛生芽,但无伸长生长,叶卷不伸展,也不是理增殖培养基。叶片不定芽适宜的诱导培养基为添加4 mg·L~(-1)BA的MS培养基,再生率为50%。其他处理再生率都在35%以下。进一步提高再生率的试验正在进行中。
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中国园艺学会2018年学术年会论文摘要集
2018年

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