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短小芽孢杆菌热稳定环糊精葡萄糖基转移酶粗酶酶学特性研究

柯涛;王庆林;惠丰立;熊兰;马向东;马立新

  从土壤分离物中筛选到一株环糊精葡萄糖基转移酶(cyclodextrin glucanotransferase,CGTase)产生菌CGT01。16SrDNA序列分析表明该菌与短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)的同源性为99%。同时根据其生理生化特征,该菌株被鉴定为短小芽孢杆菌(B.pumilus)。命名为B.pumilus.CGT01菌株。产生CGTase的最适初始pH为6.5,最适培养温度为37℃。菌株所产CGTase的最适pH值和最适反应温度分别为pH6.5和60℃,并有较高的热稳定性。60℃条件下保温,酶活基本稳定,半衰期为35 min。酶液中添加1 mmol/L Ca2+能明显提高CGTase的稳定性,60℃保温1 h后,剩余酶活仍达80%以上。SDS-PAGE检测表明酶的分子量约为78 ku左右。经高效液相色谱分析表明,CGTase作用于可溶性淀粉后的主要产物为葡萄糖、麦芽糖和β-环糊精,没有检出α和γ型环糊精产物,因此所产环糊精为单一类型,不同于同种属的其他菌株所产CG-Tase。……