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三种乙型肝炎病毒拉米夫定耐药突变的酶切分析方法及其应用

孙剑;侯金林;肖蕾;王战会;章廉;骆抗先

  目的 建立三种乙型肝炎 (乙肝 )病毒拉米夫定耐药突变的酶切分析方法 ,了解这三种耐药突变在拉米夫定治疗患者中的发生情况。方法 设计 3对HBVP基因引物进行聚合酶链反应(PCR)扩增 ,应用NdeⅠ和NlaⅢ两种限制性内切酶对PCR产物进行酶切 ,酶切产物用电泳加以分析。应用此方法检测 70例拉米夫定治疗的慢性乙肝患者中 3种拉米夫定耐药突变的发生情况。结果 NdeⅠ和NlaⅢ两种限制性内切酶对PCR产物进行酶切可有效区分HBV野株和YMDD(酪氨酸蛋氨酸天冬氨酸天冬氨酸 )变异株 ,并确定是YI(异亮氨酸 )DD或YV(缬氨酸 )DD变异。用NlaⅢ内切酶对PCR扩增产物酶切可有效区分HBV野株和L5 2 6M(第 5 2 6位氨基酸由亮氨酸变为蛋氨酸 )变异株。利用此方法发现 11例患者在服用拉米夫定过程中出现耐药突变 ,其中YIDD变异 6例 ,YVDD变异 5例 ,后者有 1例伴有L5 2 6M点突变。结论 本方法只需应用常规PCR和酶切技术 ,既可有效筛检出YMDD变异株标本 ,还可以确定属于YIDD还是YVDD变异 ,或是否伴有L5 2 6M点突变等 ,均可作为临床监测拉米夫定耐药性的参考。……