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糖谱法结合多元色谱分析比较铁皮石斛功能性多糖结构特征

韩邦兴;陈凌霄;邓勇;陈乃富;陈存武;赵静;李绍平

  目的:比较不同产地铁皮石斛功能性多糖结构特征,为其质量控制奠定基础。方法:高效凝胶色谱联用多角度激光散射和示差折光仪法(HPSEC-MALLS-RID法)用于测定多糖的重均相对分子质量、回旋半径及含量,色谱柱为TSK-GEL G5000 PWXL串联TSK Gel G3000PWXL,柱温35℃,流动相为9 mg·mL~(-1)氯化钠水溶液,流速0.5 mL·min~(-1)。气相色谱联用质谱法用于分析单糖组成及糖苷键,毛细管色谱柱为Agilent HP-5MS(30 m×0.25 mm×0.25μm),进样量2μL,用于单糖组成分析的程序升温条件为起始温度165℃,保持7 min,以5℃·min~(-1)升温至185℃,保持5 min,以4℃·min~(-1)升温至200℃,以20℃·min~(-1)升至280℃;用于糖苷键分析的程序升温条件为起始温度120℃,以5℃·min~(-1)升温至200℃,以8℃·min~(-1)升温至250℃,以20℃·min~(-1)升至280℃。基于荧光辅助凝胶电泳、高效薄层色谱-糖谱法分析功能性多糖部分酸水解和酶解产物特征,荧光辅助凝胶电泳采用200 V分离10 min,再调整电压至700 V分离40 min,凝胶在UV 365 nm下成像;TLC展开剂为正丁醇-异丙醇-水-醋酸(7∶5∶2∶1),显色剂为苯胺-二苯胺。结果:不同产地铁皮石斛多糖重均相对分子质量、回旋半径和含量分别为0.533×105~4.575×105、19.8~71.7 nm和6.28%~28.72%;铁皮石斛功能性多糖的单糖组成主要为(乙酰)甘露糖和葡萄糖,摩尔比(3.86~6.99)∶1.00,糖苷键类型主要为1,4-Manp和1,4-Glcp,摩尔比(4.51~7.89)∶1.00;不同铁皮石斛多糖的部分酸水解和酶解产物糖谱特征相似。结论:不同产地铁皮石斛功能性多糖结构具有较高的一致性,功能性多糖是铁皮石斛较好的质量控制指标。……