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用IE-HPLC、PAGE分析合成的硫代寡核苷酸相关物质“n-1”、“n-2”和“n-3”

李麒麟;周建;王小行;高小平

  目的:分析合成的n=20-mer硫代寡核苷酸中相关物质“n-1”、“ n-2”和“ n-3”杂质失败序列。方法:离子交换高效液相色谱(IE-HPLC)法和聚丙烯酰胺凝胶电泳法(PAGE)。色谱柱为Gen-Pak~(TM)FAX离子交换柱(4.6 mm×100mm),流动相A为62.5mmol·L~(-1)三羟甲基氨基甲烷盐酸(Tris·Cl),pH 8.15,流动相B为62.5mmol·L~(-1) Tris·Cl,pH 8.15,2.5 mol·L~(-1) LiCl,流动相C为100%乙腈;梯度洗脱条件为B:30%→50% 30 min,C:恒为20%;流速为0.75mL·min~(-1);检测波长为260nm。PAGE分析采用20%变性聚丙烯酰胺凝胶,恒定功率25W进行电泳。结果:IE-HPLC分离纯化出3种相关物质,通过PAGE印证了它们是由于合成偶联不完全而产生的n-1、n-2和n-3的杂质失败序列。结论:所用离子交换高效液相色谱法能将合成的硫代寡核苷酸中相关物质“n-1”、“n-2”和“n-3”杂质失败序列与全序列n一一分离出来,对硫代寡核苷酸的纯化和分析具有重要的参考价值。……