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中华猕猴桃蛋白酶在半极性介质中的构象变化和动力学研究

林沁瑛;林青松;汪白桦;李庆宏;颜思旭

  三种有机溶剂,二氧六环、二甲基甲酰胺和乙二醇,都不同程度地抑制中华猕猴桃蛋白酶催化水解赖氨酸对硝基本酯(CBZ-LYS-pNP)能力,其动力学行为符合Michaelis-Menten方程式,二氧六环的抑制作用类似于竞争性抑制类型,二甲基甲酰胺和乙二醇为非竞争性抑制,其抑制常数,分别为k_1=5.6×10~(-2)、0.58和1.60mol/L,光谱分析表明,酶在有机溶剂中,空间构象也发生了变化,随着二氧六环和二甲基甲酰胺浓度的增大,酶分子的α-螺旋度下降,无规卷曲度上升,荧光发射强度比天然酶略有增高或降低,变化的规律性不够,紫外差光谱显示,酶在6%二甲基甲酰胺中有一个243nm的负峰,此负峰随浓度的增大而增大,并略向红移,在24%二甲基甲酰胺中,负峰红移至248nm处。……