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内切葡聚糖酶基因在大肠杆菌与毕赤酵母中的表达

王瑾;邬敏辰;周晨妍

  根据绿色木霉(Trichoderma viride)WL 0422菌株内切葡聚糖酶基因egⅡ的cDNA序列,设计特异引物,以重组质粒pTG19-T-egⅡ为模板,扩增得到全长1 194bp的egⅡ成熟肽cDNA片段。将该片段分别克隆到大肠杆菌(Escherichia coli)表达载体pET-28a(+)和毕赤酵母(Pichia pastoris)表达载体pPIC9K中,并在大肠杆菌Rosse(t DE3)和毕赤酵母GS115中进行了表达。重组大肠杆菌表达蛋白占菌体总蛋白的15%,表达产物无内切葡聚糖酶活性。重组毕赤酵母经甲醇诱导实现了分泌表达,在摇床水平上酶活性达到2 788U/ml。酶学性质分析表明,该酶作用的最适pH为4.5,pH 3.5~6.0范围内酶活性保留在80%以上;最适温度为50℃,55℃以下酶的稳定性在90%以上。……   
[关键词]:绿色木霉;内切葡聚糖酶;大肠杆菌;毕赤酵母;表达;酶学性质
[文献类型]:期刊
[文献出处]: 《生物技术通报2008年03期
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