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人血清白蛋白-C肽融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达

周利苹;张莲芬;雷楗勇;张文婷;蔡燕飞;金坚

  目的构建重组表达人血清白蛋白(HSA)-C肽(CP)融合蛋白的毕赤酵母表达菌株。方法根据表达系统的密码子偏好性优化CP基因,酶切连接pBlue-HSA质粒(HSA1 800bp)和CP(100bp)基因,将HSA-CP融合基因双酶切后插入分泌表达载体pPIC9K中,重组质粒pPIC9K-HSA-CP经SalⅠ线性化后,电击转化毕赤酵母GS115,表型筛选Mut+转化子。PCR鉴定后,用甲醇诱导摇瓶分泌表达。结果融合基因约为1 900bp,序列测定正确。SDS-PAGE分析表明表达融合蛋白的相对分子量约为70kD,摇瓶培养表达量为140mg/L,Western blot鉴定显示表达的融合蛋白为HSA和CP的杂合分子。结论实现了HSA-CP融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达,细胞活性研究显示HSA-CP融合蛋白对人胚肾293细胞的生长具有一定的促进作用。……   
[关键词]:C肽;人血清白蛋白;融合蛋白;毕赤酵母
[文献类型]:期刊
[文献出处]: 《生物技术通报2008年03期
[格式]:PDF原版; EPUB自适应版(需下载客户端)