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甾醇C-24甲基转移酶基因在酿酒酵母中的内源表达及工程菌麦角甾醇的合成

孟云霞;何秀萍;刘楠;郭雪娜;张博润

  通过高保真PCR克隆到含酿酒酵母甾醇C-24甲基转移酶基因编码序列及终止子序列的DNA片段ERG6,以大肠杆菌-酿酒酵母穿梭质粒YEp352为载体,磷酸甘油酸激酶基因PGK1启动子为上游调控元件构建了酵母菌表达质粒pPERG6。通过同源重组,以铜离子螯合蛋白基因CUP1替换染色体上ERG6基因内部序列获得ERG6破坏菌株YS58-erg6,其中麦角甾醇的合成被阻断,同时细胞的生长也受到明显抑制。表达质粒pPERG6转化破坏菌株YS58-erg6后,不但使细胞恢复了合成麦角甾醇的能力,细胞生物量也得到明显提高,这说明表达质粒上的ERG6基因得到了功能性的表达。分别用载体质粒YEp352和表达质粒pPERG6转化酿酒酵母单倍体菌株YS58,获得对照菌株YS58(YEp352)和重组菌株YS58(pPERG6)。重组菌株YS58(pPERG6)生物量和麦角甾醇含量分别是对照菌YS58(YEp352)的1.23和1.32倍。可见甾醇C-24甲基转移酶基因的高表达可以增强酵母细胞麦角甾醇的合成能力。……   
[关键词]:酿酒酵母;甾醇C-24甲基转移酶;高表达;麦角甾醇
[文献类型]:期刊
[文献出处]: 《生物工程学报2008年01期