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加载HCMV抗原肽的HLA-A*0201单体及其四聚体制备和鉴定

何贤辉;徐丽慧;刘毅;蔡小嫦;曾耀英

  细胞毒T淋巴细胞 (CTL)在控制病原体感染以及抗肿瘤过程中发挥重要作用 ,因而特异性CTL的检测相当重要 ;而过去检测CTL的方法都是间接的 ,最近发展起来的四聚体技术则是直接检测抗原特异性CTL的有效而特异的方法 ,成为目前研究T细胞免疫应答的关键技术。报道一种简化的四聚体制备程序 ,利用该程序成功制备加载人巨细胞病毒 (HCMV)抗原肽的HLA_A2四聚体 ,具有特异性结合CTL活性。HLA_A0 2 0 1重链基因是通过RT_PCR方法从HLA_A2 + 供者白细胞中克隆 ,进而以PCR方法构建在羧基端融合生物素化酶BirA底物肽 (BSP)的HLA_A0 2 0 1(A2 )重链胞外区原核表达载体 ,A2重组蛋白在大肠杆菌中得到高表达 ,主要以包涵体形式存在。加载抗原肽的可溶性A2单体是A2胞外区在轻链 β2 微球蛋白和HLA_A2限制性HCMVpp6 5 495_50 3抗原肽 (NLVPMVATV ,NLV)存在时通过稀释法复性获得 ,以BirA对其进行生物素化 ,然后以阴离子交换树脂纯化 ,得到的纯化A2_NLV单体与Streptavidin_PE按 4 :08比例混合形成四聚体 ,结合程度在 85 %以上 ,流式细胞仪分析显示该四聚体具有与HLA_A2 + 供者的特异性CTL结合活性。总之 ,这种简化的四聚体制备程序 ,不仅有利于该技术的推广 ,为特异性T细胞免疫研究建立必要的技术平台 ,而且A2_NLV四聚体……   
[关键词]:人类白细胞抗原;四聚体;细胞毒T淋巴细胞;包涵体;人巨细胞病毒
[文献类型]:期刊
[文献出处]: 《生物工程学报2004年03期
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