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人食管癌cDNA酵母杂交文库的构建与鉴定及其应用

许丽艳;李恩民;牛永东;蔡唯佳;韩溟;吴炳礼;张灿;沈忠英;曾毅

  以往在研究由促癌物 12o 十四烷酰佛波醇 13 乙酯 (12o tetradecanoylphorbol 13 acetate,TPA)诱导的人永生化食管上皮细胞恶性变中基因的差异表达情况时 ,曾获得中性粒细胞明胶酶相关lipocalin (neutrophilgelatinase associatedlipocalin ,NGAL)等新的食管癌癌变相关基因 .为深入研究这些癌变相关基因在食管癌中以蛋白质 蛋白质或蛋白质DNA相互作用为基础的功能网络调控关系 ,建立了一个食管癌cDNA酵母杂交文库 .采用Trizol试剂从一种新的人食管癌细胞 (SHEEC ,由人永生化食管上皮细胞转化而来 )中提取细胞总RNA ,采用OligotexmRNAKit从细胞总RNA中制备PolyA+ mRNA ,采用SuperScriptTM ChoiceSystemForcDNASynthesisKit合成cDNA ,以PolyA+ mRNA为探针 ,化学发光法监测cDNA合成的质量 ,以 pGADT7为载体构建了SHEEC细胞的cDNA酵母杂交文库 .文库的滴度为 1 19× 10 9cfu/ml,重组片段大小主要集中在 05~60kb ,重组率为 5 0 % .在此基础上 ,应用酵母单杂交技术手段对该文库中的NF κB元件结合因子进行了筛选 ,在SD/ his/ leu/[+15mmol/L 3 AT ]缺陷培养基平板上共获得了约 36 0个单克隆 .按照平板上酵母单克隆直径的大小 ,选择直径大于 2mm者 91个 ,提取质粒进行酶切鉴定和一对一酵母单杂交验?……   
[关键词]:cDNA文库;酵母杂交;食管癌细胞系
[文献类型]:期刊
[文献出处]: 《生物化学与生物物理进展2003年02期
[格式]:PDF原版; EPUB自适应版(需下载客户端)