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重组人卵ZP3肽段在毕赤酵母中的表达

徐放;谢杏美;孔明惠;曹佐武

  目的:用毕赤酵母(Pichia pastoris)表达人透明带hZP3片段,研究其抗生育作用。方法:设计特定引物从hZP3全长序列中PCR扩增794~1282nt基因片段,将扩增片段克隆到酵母表达载体pPICZα上,构建成重组质粒pPICZα-hZP3CT,线性化后的重组质粒导入毕赤酵母中,筛选出高拷贝菌株,甲醇诱导目的蛋白表达。用SDS-PAGE和Western blotting分析表达产物。结果:成功构建酵母表达载体,并在酵母菌株X-33中诱导表达重组蛋白。重组蛋白可以与鼠抗重组人卵透明带hZP3融合肽段的抗血清发生特异结合,表明目的基因成功表达。结论:重组hZP3蛋白已在酵母中成功表达,目的蛋白能与相应的抗体结合。……