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重组质粒HF443-EGFP的构建及其在赤潮毒素检测中的应用初探

刘洁生;杨维东;车军;甄熹;江天久;吴春利

  采用基因工程的方法 ,进行重组质粒HF443EGFP的构建和在哺乳动物细胞中的表达 ,并进行了其用于赤潮毒素检测的可能性研究。结果表明 ,用PCR技术扩增EGFP基因 ,用XbaⅠ、HindⅢ双酶切并纯化 ,与同样双酶切并纯化的HF443质粒连接 ,可构建重组质粒HF443EGFP ;利用LipofectAMINE 2 0 0 0转染体外培养哺乳动物BIU 87细胞。在培养体系中加入不同浓度的GTX ,而后加入Na+通道激活剂乌头碱以诱导绿色荧光蛋白表达 ,荧光显微镜下观察细胞中绿色荧光蛋白表达的变化情况。细胞发出的荧光随毒素浓度的增加而减弱 ,存在一定的剂量效应关系 ,提示毒素GTX可显著影响绿色荧光蛋白的表达 ,重组质粒HF443EGFP用于赤潮毒素检测有一定的可行性。……   
[关键词]:c-fos启动子;绿色荧光蛋白;BIU-87细胞;赤潮毒素
[文献类型]:期刊
[文献出处]: 《海洋与湖沼2003年05期
[格式]:PDF原版; EPUB自适应版(需下载客户端)