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人热休克蛋白70D的基因克隆、表达及蛋白纯化

常卫红

  目的 :研究热休克蛋白 70 D(heat shock protein 70 D,HSP70 D)的基因克隆、重组表达及纯化。 方法 :采用 RT- PCR方法从 He L a细胞中克隆 HSP70 D全长编码区 c DNA序列 ,构建原核表达载体 p ET2 4 a(+) - HSP70 D,经过 DNA序列测定证实其序列正确。完成基因工程人 HSP70 D的高表达工程菌的筛选后 ,对其发酵、蛋白表达条件及重组蛋白的纯化条件进行优化。 结果 :重组表达载体经序列测定及酶切鉴定与理论推测结果相符 ,高表达工程菌经优化表达条件后 rh HSP70 D的表达量可占菌体总蛋白的 2 0 %以上。经过低浓度乙醇沉淀、DEAE阴离子交换、疏水柱层析及 S2 0 0凝胶过滤柱层析后 ,获得了纯度大于 95 %的 rh HSP70 D。 结论 :本研究为进一步开展以 HSP70 D为基础的肿瘤免疫治疗研究提供了实验基础。……   
[关键词]:热休克蛋白70;基因克隆;重组表达;纯化
[文献类型]:期刊
[文献出处]: 《第二军医大学学报2002年10期
[格式]:PDF原版; EPUB自适应版(需下载客户端)