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多花黄精ISSR反应体系的建立及正交优化设计

张红梅;邵元华;龙甜甜;项艳;王进;汤锋

  通过对多花黄精ISSR-PCR反应中的Taq酶、buffer(Mg2+)、模板DNA、dNTP以及引物5个关键因素进行了5因素4水平的正交设计试验,确立了适合多花黄精基因组DNA的稳定性强、扩增最多数量谱带的ISSR-PCR最优反应体系,即25μL的反应体系中含有1.0 U Taq DNA聚合酶,3.5 mmol.L-1buffer(Mg2+),80 ng模板DNA,0.08 mmol.L-1dNTP和0.16μmol.L-1引物。采用建立的多花黄精ISSR-PCR最佳反应体系进行退火温度梯度试验,确定了引物UBC841的最适退火温度为54.8℃,且最适退火温度因引物而异。这一优化的ISSR-PCR反应体系的建立为今后利用ISSR技术进行黄精种质资源分类、遗传图谱构建和基因定位奠定了良好的技术基础。……   
[关键词]:多花黄精;ISSR;正交设计;反应体系;优化;退火温度
[文献类型]:期刊
[文献出处]: 《安徽农业大学学报2012年03期
[格式]:PDF原版; EPUB自适应版(需下载客户端)