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水貂细小病毒的分离鉴定及卵黄抗体的制备

谭婷婷

   水貂传染性肠炎又名水貂病毒性肠炎,是由水貂肠炎病毒(MEV)引起的一种急性、高度接触性、致死性传染病。该病广泛存在于世界各国,是威胁水貂养殖的最大疾病之一,给养貂业带来巨大的经济损失。在我国水貂传染性肠炎的预防主要是定期免疫接种,但近年来应用疫苗免疫失败的现象时有发生,有时呈地方性流行。发病水貂除采取对症治疗外,没有有效的治疗药物,为此,我们开展水貂水貂的流行病学研究工作,并在此基础上,开展抗水貂病毒性肠炎抗体的研究工作。 本研究应用猫肾F81细胞从疑似MEV感染的水貂病料中分离病毒,通过血凝试验、PCR等方法对分离得到的病毒进行鉴定。同时对分离得到的病毒和大连送检的水貂病料的VP2基因进行了测序和遗传进化分析。在此基础上,以分离得到的病毒为抗原,选择种属关系远的蛋鸡作为免疫对象,制备卵黄抗体。利用氯仿和硫酸铵结合的方法提纯卵黄抗体,应用血凝抑制试验评定抗体的效价。结果利用F81细胞成功分离出一株病毒,命名为MEV-ZYL-1,鉴定结果表明这是一株水貂细小病毒强毒株,具有良好的免疫原性。序列测定结果表明,MEV-ZYL-1与引起大连水貂肠炎的病毒同源性100%,VP2基因全长1755个核苷酸,编码584个氨基酸,与MEV标准毒株MEV-type2 VP2基因大小相同,已上传Genebank,序列登录号为GU272028、GU272029。基于细小病毒的系统发生表明,MEV-ZYL-1与2009年分离株Manzhouli、Suning亲缘关系近,为目前国内流行株。用MEV-ZYL-1为种毒制备灭活疫苗免疫健康产蛋鸡,得到含有抗MEV抗体的鸡蛋,用氯仿和硫酸铵结合的方法提取卵黄抗体,血凝抑制试验表明抗体水平随免疫次数的增加呈上升趋势,三免后的血凝抑制价为1:1024。对感染MEV的水貂进行治疗,治愈率100%,研究结果显示,MEV卵黄抗体可进一步开发用于水貂细小病毒肠炎的治疗。……   
[关键词]:水貂细小病毒;分离鉴定;VP2基因;卵黄抗体
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:东北林业大学2010年