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海藻糖和亚牛磺酸对小鼠无透明带胚胎体外发育的影响

刘维平

   为完善无透明带胚胎体外培养体系,提高无透明带胚胎体外培养的发育率和质量,本试验通过对培养胚胎的2-细胞率、4-细胞率、桑胚率、囊胚发育率及囊胚细胞数等指标的统计分析来研究KSOM、CZB、M16和M199等四种不同基础培养基对无透明带小鼠胚胎体外发育的影响,以期筛选出最优的培养基,同时,验证了添加胎牛血清和血清白蛋白后对各个指标的影响,最终确定添加剂量。然后以筛选结果为基础培养基,分别在其中添加了不同浓度的海藻糖和亚牛磺酸进行试验,探究它们对小鼠无透明带胚胎体外发育的影响。选取去透明带小鼠胚胎发育的2-细胞和囊胚期培养液,采用试剂盒测定超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的酶活及丙二醛含量,初步探究海藻糖和亚牛磺酸对体外培养无透明带胚胎的抗氧化作用。具体试验结果如下: 1.将处理好的小鼠无透明带胚胎转移到四种不同培养基中,分别添加不同浓度的胎牛血清和牛血清白蛋白进行多次培养筛选,综合各项指标指数,最终确定了以添加20%胎牛血清的KSOM培养基作为本试验研究的标准培养基,其囊胚率最高,达到31.58%。 2.添加海藻糖对小鼠无透明带胚胎体外发育有一定的促进作用,特别是对桑胚率和囊胚率的影响较对照组差异均极显著(P<0.01),其中,添加4μg/ml组的效果最好,桑胚率、囊胚率及囊胚回收率都达到该试验的最高值,分别为44.97%、31.95%和84.36%。 3.添加海藻糖的胚胎培养液中SOD和GSH-Px活性整体上都随培养时间的推移而逐渐降低,而MDA的含量却在逐渐的升高,各添加组SOD和GSH-Px活性较对照组差异都显著(P<0.05),但各添加组间差异不显著(P>0.05),其中添加6μg/ml的2-细胞组和4、6和8μg/ml的囊胚组较对照组差异极显著(P<0.01),但MDA含量在2-细胞期各添加组与对照差异不显著(P>0.05),囊胚期仅有6和8μg/ml添加组较其它组差异显著(P<0.05)。 4.在含有20%胎牛血清的KSOM培养基中添加一定浓度的亚牛磺酸可以提高无透明带小鼠胚胎体外发育率,其中添加6μg/ml亚牛磺酸组的2-细胞率、4-细胞率、桑胚率和囊胚率均显著高于其它试验组(P<0.01),分别达到了86.61%、76.53%、44.99%和32.21%,添加4μg/ml亚牛磺酸的处理组囊胚回收率最高(81.25%),其它几个处理组相比均差异显著(P<0.05);随着添加浓度的提高,亚牛磺酸的促进作用减弱,8μg/ml添加组与对照组相比,各个发育阶段胚胎的发育率均不显著(P>0.05),但并未出现明显的抑制现象。 5.添加亚牛磺酸的胚胎培养液中SOD和GSH-Px活性整体上也随培养时间的推移而逐渐降低,而MDA的含量却逐渐升高,各添加组SOD和GSH-Px活性较对照组差异显著(P<0.05),但各添加组间差异不显著(P>0.05),其中添加4、6和8μg/ml的囊胚组SOD和GSH-Px活性较对照组差异极显著(P<0.01);MDA含量在2-细胞期各添加组与对照差异不显著(P>0.05),囊胚期各添加组较对照组差异显著(P<0.05)。……   
[关键词]:小鼠;无透明带;胚胎培养;海藻糖;亚牛磺酸
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:西北农林科技大学2010年