手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

鸭病毒性肝炎病毒的分离鉴定及ELISA检测抗体方法的建立

冯广鹏

   鸭病毒性肝炎(Duck virus hepatitis,DVH)是6周龄以下雏鸭的一种传播迅速、高度致死、肝肿大出血为主要特征的病毒性疾病,病原为鸭肝炎病毒(Duck hepatitis virus,DHV)。该病在国内雏鸭群中频频发生,给养禽业生产造成了极大的损失。本实验从一群发病鸭的病料中分离到一株鸭肝炎病毒,并建立了检测鸭肝炎病毒抗体的ELISA快速检测方法,取得了如下结果: 1.鸭病毒性肝炎病毒株的分离鉴定 对河南省内疑似鸭病毒性肝炎感染鸭病料的收集,通过细菌分离、病毒分离、中和试验、动物回归试验、雏鸭保护试验以及病毒对红细胞的凝集试验,分离到一株鸭病毒性肝炎Ⅰ型病毒株,并对病毒进行了初步鉴定,该病毒的鸡胚半数致死量(ELD50)为0.2ml 10-7. 659稀释的病毒液,中和试验结果表明将血清作1:75倍稀释可保护50%的鸡胚免于死亡。 2.鸭抗DHV血清的制备及鸭传染性肝炎血清抗体ELISA快速检测方法的建立 通过对鸭病毒性肝炎病毒种毒的处理和鸭的多次免疫,制备了鸭抗DHV血清。 将通过鸭胚传代的病毒经过纯化后,作为包被抗原,建立了一种检测血清中DHV抗体的间接ELISA方法。通过对方法学的研究,确定了ELISA反应的各组分的最适工作条件,确定抗原最佳包被浓度为7.5μg,血清最佳稀释度约为1:320,阳性血清OD450值(P)接近1.0,阴性血清值(N)为0.125,P/N值最大。阴性和阳性分界明显;通过对40份阴性鸭血清的检测结果,确定阴阳性临界点为0.2。根据建立的ELISA方法及最佳反应条件,确定力方法的敏感性和特异性。结果表明,本试验建立的间接-ELISA法可用于鸭血清中鸭肝炎病毒抗体水平的检测。……   
[关键词]:鸭病毒性肝炎;鸭肝炎病毒;分离鉴定;酶联免疫吸附试验;抗原;抗体
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:河南农业大学2009年