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甘薯膨大生长相关基因的初步研究

蔡辉儒

   能源已成为影响全球经济发展的重要问题,中国是能源缺乏和能源消耗大国,合理开发、利用生物能源尤其是粮食酒精是探索新型可再生能源的一种途径。甘薯具有很高的生物质产量,在生产燃料方面具有独到的优势。因此对甘薯进行深入的研究,提高淀粉含量和产量显得尤为重要。本论文利用分子生物学手段研究与甘薯膨大生长相关的候选基因,最后获得了如下结果: 1、建立了一套适合于甘薯的改良CTAB法提取总RNA的技术体系。针对甘薯组织中富含多糖多酚的特点,改进了CTAB法,采用β-巯基乙醇和PVP去除酚类,KAc及无水乙醇去除多糖,皂土吸附蛋白和抑制RNA酶活性,LiCl沉淀,提取得到的RNA产率高,电泳条带整齐、清晰,符合后续分子实验要求。 2、建立了甘薯cDNA-AFLP分析的反应体系。通过优化AFLP扩增体系,发现,酶切时使用Buffer Y~+/TANGO TM缓冲液在37℃酶切3h后再65℃酶切3h的效果最佳;最佳体系扩增体系为预扩30μl、选扩20μl,反应程序为:94℃预变性2min,94℃变性30s,65℃退火1min(-0.7℃/cycle),72℃延伸1min,共12个循环;其后94℃变性30s,56℃退火30s,72℃延伸1min,共23个循环,最后72℃延伸5min然后4℃保温。 3、确定了一种简易的银染方法并得到了31组差异片段:在对4种银染方法进行比较后我们利用效果较好的方法一进行条件优化,通过对不同的温度和pH以及试剂的试验,最终确立了一种较为简单、经济、快速而且效果不错的银染程序并得到了31组差异片段。 4、利用Expansin是一个多基因家族的特点,根据基因库中已登录的Expansin氨基酸保守序列设计Expansin简并引物,通过PCR我们得到了两条可能是Expansin基因片段的产物;以上实验结果的获得为以后深入研究甘薯膨大生长相关基因奠定了一定的基础。……   
[关键词]:甘薯;膨大;扩增片段长度多态性;银染
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:西南交通大学2009年