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外源性PUMA表达增加HPV阳性宫颈癌放疗敏感性的体外研究

陈琰

   目的宫颈癌发病率在全球妇女恶性肿瘤中居第二位。PUMA(p53 up-regulatedmodulator of apoptosis)是p53的下游基因,具有强大的促凋亡作用。本研究以腺病毒为载体,将PUMA基因导入HPV阳性宫颈癌细胞HeLa和CaSki,分析PUMA对宫颈癌细胞的作用以及与放疗联合应用后的效果。 方法应用MTT法比较Ad-PUMA和Ad-p53对HeLa和CaSki细胞增殖的影响,平板克隆方法检测Ad-PUMA与X射线联合应用后对细胞生长的影响,并通过DAPI染色、流式细胞检术检测细胞凋亡情况。Western Blot法检测X射线处理后HeLa细胞PUMA表达。 结果RT-PCR和Western Blot证实Ad-PUMA感染HeLa细胞3h后PUMA即有表达。MTT结果显示Ad-PUMA能够明显抑制HeLa和CaSki细胞增殖,而Ad-p53对细胞生长无明显抑制作用。DAPI染色和流式细胞术证实Ad-PUMA可诱导HeLa细胞凋亡。Western Blot显示X射线能够诱导HeLa细胞PUMA表达升高,具有时间和剂量效应。Ad-PUMA与X射线联合应用后可显著增加细胞凋亡,减少平板克隆形成数,但Ad-PUMA对X射线引起的G2期阻滞无明显影响。 结论PUMA在放射线诱导肿瘤细胞凋亡的过程中发挥作用。Ad-PUMA抑制宫颈癌细胞增殖,诱导细胞凋亡。与X射线联合应用后,Ad-PUMA显著提高宫颈癌细胞放疗敏感性,促进放疗诱导的肿瘤细胞凋亡。……   
[关键词]:PUMA;宫颈癌;基因治疗;凋亡
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:中国协和医科大学2008年