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不同波长光照对母鸡间脑和中脑c-fos基因表达的影响

张毅

   本实验分别采用红(660nm)、绿(560nm)、蓝(480nm)三种发光二极管对60只150日龄白来航蛋鸡进行人工照明,每组20只。将母鸡右眼遮光7天后接受20Lux的光照刺激1.5h,暗适应1.5h.经遮光和光照刺激后,用两种方法检测FOS蛋白:1)免疫组化方法,灌流固定,取脑制作石蜡切片。通过免疫组化方法检测由不同波长光照刺激引起c-fos基因在间脑和中脑的表达; 2)蛋白印迹法,对母鸡进行光照刺激后,直接断头,将鸡头在冰上迅速冷却,然后在低温环境下剥离出鸡脑。将剥离出来的鸡大脑用锡纸包好,迅速放于-80℃冰箱中冷冻。将冷冻后的鸡脑捣碎,10000转/秒离心,提取上清液,测出提取液中的蛋白含量,然后用蛋白印迹法来验证提取液中是否含有FOS蛋白,以此来再次验证FOS蛋白在鸡脑中的存在。本试验还用免疫组化的方法研究了几种神经肽GnRH、GABA、VIP和β-END在不同波长光照刺激下的表达。通过对FOS蛋白和几种神经肽的检测,阐明由不同波长光照刺激引起的c-fos基因和神经肽在母鸡间脑和中脑的表达的影响及其内在联系,由此来探究光照对鸡生殖性能,即对母鸡产蛋量的影响,为进一步了解光照对鸡产蛋的影响机理打下基础。 结果显示,间脑和中脑内有大量Fos样免疫反应阳性神经元,主要见于左侧,分布于圆核(Rt)、室旁核(PVN)、前背外侧核(DLA)、外侧膝状核腹侧部(GLv)和缰核(HB)、中央灰质层(SGC)、峡核大细胞部(Imc)和小细胞部(Ipc)、峡视核(ION)、半月核(SLu)、中脑外侧核背侧部(MLd)、红核(RN)和滑车神经核(nIV)等核团内,其中Rt、PVN、SGC、Imc和Ipc内免疫反应阳性样神经元最多。并且蛋白印迹法(western blot)检测的结果显示,49kD到90kD间有明显特异条带,即FOS蛋白条带,证明在母鸡脑蛋白提取液中有FOS蛋白存在。不同波长光照刺激均能引起母鸡间脑和中脑c-fos基因的表达,但影响有差异。绿光组比红光组表达强,普遍差异显著,蓝光组表达介于两者之间。但在GLv核中红光组比蓝光组表达强。并且不同波长光照刺激均能引起母鸡间脑和中脑内几种神经肽的表达,但影响有差异。对于GnRH和VIP来说,绿光比红光表达强,普遍差异显著,蓝光组表达介于两者之间;对于β-END和GABA来说,红光比绿光表达强,普遍差异显著,蓝光组表达介于两者之间。……   
[关键词]:母鸡;波长;c-fos基因;免疫组织化学;神经肽
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:河北农业大学2009年