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褪黑素对人胰腺癌细胞株SW1990生长及血管生成的影响

朱华

   目的:研究褪黑素(Melatonin,MT)对人胰腺癌细胞株SW1990细胞体外生长及血管形成的影响,同时探讨其对胰腺癌细胞株SW1990作用的可能机制。 方法:采用MT浓度为0.1、0.5、1.0、2.5、5.0mmol/L处理胰腺癌SW1990细胞后,应用四氮唑盐(MTT)法检测OD值,计算对照组和各实验组SW1990细胞的抑制率,并计算最适宜的褪黑素IC50;取MT浓度为1.0、2.5、5.0mmol/L处理胰腺癌SW1990细胞后进行流式细胞术及AnnexinⅤ/PI早期凋亡检测细胞凋亡率和细胞周期的变化,免疫印迹法(Westen Blotting)检测细胞凋亡因子cl-2、bax蛋白表达情况,RT-PCR检测VEGFmRNA表达水平的变化,鸡胚绒毛尿囊膜实验观察MT对血管生成的影响。 结果:(1)MTT法显示MT可明显抑制SW1990细胞的生长,并随着浓度的增加和作用时间的延长而明显增强(P<0.05)。(2)流式细胞术及AnnexinⅤ/PI早期凋亡检测出SW1990细胞经MT作用48小时后,细胞有明显凋亡,且以早期凋亡为主,在1.0mmol/L浓度下早期凋亡率为(24.5±2.14)%,而在5.0mmol/L浓度下为(44.76±3.24)%,与MT浓度呈正相关,且随着浓度的增加SW1990细胞周期G0/G1期细胞比例上升,从(72.55±4.32)%上升到(85.33±5.32)%,S期细胞比例下降(P<0.05)。(3)Western Blot结果显示MT作用于SW1990细胞48h可使细胞中的bcl-2蛋白表达下降,bax蛋白表达升高,bcl-2/bax比值分别为对照组1.84±0.21,MT1组1.21±0.25,MT2组0.70±0.19,MT3组0.55±0.13,差异具有统计学意义(P<0.05)。(4)RT-PCR检测VEGF表明SW1990细胞经MT作用48小时后,VEGFmRNA的表达呈浓度依赖性下降,各浓度组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。(5)鸡胚绒毛尿囊膜实验发现MT处理组(1.0mmol/L、2.5 mmol/L、5.0 mmol/L)鸡胚绒毛尿囊膜二、三级血管数目减少,浓度越高作用越明显,各组三级血管的数目与生理盐水组比较,差异有显著性(P<0.01)。从形态上看,生理盐水组(NS)血管分支状结构完整,各级血管清晰可见,MT组可见血管明显变细,呈迂曲状向外周生长,失去正常的血管树枝状分布,并可见鸡胚绒毛尿囊膜水肿。 结论:MT可抑制胰腺癌SW1990细胞的生长,且呈时间和剂量的依赖性,其机制可能是直接抑制肿瘤细胞增殖;阻滞细胞周期于静止期;诱导细胞早期凋亡;抑制血管生成。 第二部分褪黑素联合吉西他滨对胰腺癌细胞SW1990的影响 目的探讨褪黑素(melatonin,MT)联合吉西他滨(Gemcitabine,GEM)对胰腺癌SW1990细胞的协同抑制作用及机制。 方法以浓度为1.5mmol/L的褪黑素联合20μmol/L的吉西他滨处理对数生长期的人胰腺癌SW1990细胞,应用MTT比色法检测OD值,计算对照组和各实验组SW1990细胞的抑制率;AnnexinV/PI双染法检测SW1990细胞早期凋亡情况;RT-PCR半定量检测Bcl-2mRNA及BaxmRNA的表达水平。 结果褪黑素和吉西他滨都能有效地抑制人胰腺癌SW1990细胞增殖,二者联合作用后,具有协同效应,MT组作用SW1990细胞48h时细胞早期凋亡为(26.24±7.58)%,GEM组为(34.12±6.43)%,联合组为(42.86±10.05)%,联合组晚期凋亡率也明显增加;细胞凋亡因子Bcl-2表达明显下降,促细胞凋亡因子Bax表达上升,各组与对照组及单药组与联合组相比均有统计学意义(P<0.05)。 结论褪黑素联合吉西他滨可明显抑制人胰腺癌SW1990细胞增殖,且呈时间-剂量依赖性。其机制可能通过促进细胞凋亡而发挥作用。……   
[关键词]:褪黑素;吉西他滨;协调效应;凋亡;胰腺癌;褪黑素;胰腺癌;细胞凋亡;Bcl-2;Bax;VEGF
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:苏州大学2009年