手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

碱性环境下用离子液体结晶蛋清溶菌酶

丹媛媛

   蛋白质晶体学是一门十分活跃的边缘学科。一个蛋白质晶体结构的测定除去结构本身的价值外,对了解蛋白质的功能、蛋白质与疾病之间的关系及药物设计等有重要的价值和意义。但到目前为止,适合X射线衍射的生物大分子晶体的获得仍是这一领域的主要技术瓶颈之一,所以在结晶方法的创新、结晶条件的优化、结晶机理的研究和观测方法等方面还需要不断得到突破。 离子液体(ILs)的研究已经成为目前化学界的热点课题之一,离子液体在生命科学领域也开始得到应用,尤其是作为生物催化反应的溶剂或共溶剂的研究更是备受关注,近年来,离子液体也开始应用于蛋白质结晶方面。 溶菌酶是一种易于生长出单晶的蛋白质,一直以来作为模型蛋白被广泛用于蛋白质结晶机理和方法研究。本论文选择溶菌酶作为研究的蛋白质进行单晶培养,研究了离子液体[bmim][BF_4]和[bmim]Cl对结晶过程的影响。首先,分别采用一步法和两步法合成了离子液体[bmim]Cl和[bmim][BF4],并采用红外光谱法表征了其化学结构。其次,为了进一步研究离子液体对蛋白质晶体生长过程的影响机制,采用BCA法通过紫外-可见分光光度计测定蛋白质在碱性离子液体-水混合溶液中的溶解度,结果表明,离子液体在体系中起到了类似沉淀剂或添加剂的作用,促进了蛋白质分子从溶液中的析出。然后,通过悬滴法实验找出溶菌酶晶体生长的最优条件,并在该条件下进行了溶菌酶的批量结晶,得到了体积大而质量好的溶菌酶晶体。 通过一系列的对比实验,研究离子液体对蛋白质结晶的作用和影响。结果表明,离子液体是一种良好的蛋白质结晶添加剂。离子液体在蛋白质结晶过程中,促进了蛋白质晶核的形成并且能够影响晶体的生长速度。可以通过调节离子液体的含量来控制蛋白质结晶的速度、大小和质量。 鉴于离子液体在蛋白质结晶过程中的作用,本论文分别用[bmim][BF_4]、[bmim]Cl两种离子液体通过结晶法对蛋清进行直接结晶来提取溶菌酶。实验结果表明,将离子液体[bmim][BF_4]作为添加剂,采用直接结晶法从蛋清中提纯制备蛋清溶菌酶,不仅操作简便,而且大大缩短了结晶时间,提高了结晶效率和晶体的质量。……   
[关键词]:蛋白质结晶;离子液体;蛋清溶菌酶;单晶
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:哈尔滨工程大学2007年