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甘草细胞培养生产甘草黄酮的条件优化及黄酮含量分析研究

王磊

   本文以甘草细胞培养合成黄酮化合物为目标,从甘草细胞诱导、筛选及悬浮培养中的生理生化特征和生长影响因子等方面,围绕以下内容进行了研究: 1.通过诱导甘草种子下胚轴建立甘草愈伤组织,并对获得的不同细胞系进行评价筛选。结果表明,预处理可提高种子发芽率,缩短萌发时间;激素联合使用可以改善愈伤组织质量;胚性细胞的多少直接影响愈伤组织的不同状态及黄酮含量的高低;光照可以明显促进甘草细胞的生长和黄酮物质的积累;筛选获得的优良细胞系生长曲线为“S”形,生长周期在32天左右。 2.对甘草培养物中次生代谢产物成分进行了分析,建立了培养物中黄酮物质的测定方法。实验表明,培养物中未检测到甘草酸,其黄酮物质主要成分可能是结构中不包含邻二酚羟基的黄酮、黄酮醇、二氢黄酮类。 3.甘草细胞生长与产物合成动力学研究。研究表明,悬浮条件下细胞生长曲线呈“S”型,生长周期20天左右;生物量与黄酮产量正相关。 4.对MS培养基中甘草细胞生化特征及营养物质消耗规律进行了研究。结果表明:蔗糖、还原糖基本消耗完,生长末期总糖有一定剩余;培养基中磷酸盐、硝酸盐基本满足甘草细胞的生长;甘草细胞培养液的pH值呈现先降后升的趋势;甘草细胞可溶性蛋白呈现单峰型,先升后降变化;胞外可溶性蛋白与生物量在对数生长期内有良好的线型关系。 5.对多个影响细胞生长与黄酮合成的理化因子进行了研究。研究表明,2,4-D对甘草细胞生物量的增长有显著影响;培养条件为MS,B5基本培养基、初始pH 5.8-7.0、60-80 g/L接种量、蔗糖50 g/L添加量、120 mmol/L氮源浓度且NH4+/NO3-比例10/50、磷酸盐浓度为2.5 mmol/L、钙盐6.0 mmol/L时,甘草细胞生长与黄酮的合成较好,且蓝光有利于黄酮含量的提高。……   
[关键词]:甘草;细胞培养;黄酮;生理生化;条件优化
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:华中科技大学2007年