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恩诺沙星在中华绒螯蟹中的代谢动力学及其休药期研究

吴光红

   江苏的中华绒螯蟹已发展成为超过100亿元人民币的大产业,名牌大闸蟹畅销国内外。但是,与此同时,中华绒螯蟹的质量安全也经受着越来越严重的疾病暴发、兽药残留、种质退化的困扰。本工作侧重研究了中华绒螯蟹养殖过程中使用恩诺沙星的使用问题,旨在对该药品在中华绒螯蟹中的应用和推广提供科学的依据。研究主要分为如下几个部分:(1)中华绒螯蟹体内恩诺沙星等喹诺酮药物残留检测方法的研究;(2)恩诺沙星在中华绒螯蟹体內的药物代谢动力学研究;(3)水温对恩诺沙星在中华绒螯蟹体內药物代谢动力学的影响;(4)恩诺沙星与中华绒螯蟹血浆蛋白结合率的研究;(5)恩诺沙星在中华绒螯蟹体内使用修药期(withdrawal time)的研究。具体如下: 1、建立了中华绒螯蟹体内恩诺沙星、环丙沙星和诺氟沙星残留量同时检测的反相高效液相色谱法(RP-HPLC)方法。考察了三种喹诺酮类药物残留的分离与流动相组成、pH值及乙腈含量的关系,优化了色谱条件。中华绒螯蟹肝脏成分复杂,脂肪类化合物含量高,色素等干扰物质多,极易干扰目标物的检测。通过改进前处理过程,采用振荡萃取-浓缩-高速离心萃取的前处理过程,有效地减少了干扰物质对检测结果的影响。研究表明,该方法线性关系和重复性良好,样品中三种喹诺酮类药物残留的回收率在73%~86%之间,相对标准偏差2.01%~4.29%(n=5),最低检测限为10μg·kg~(-1)。用该方法对肌肉注射给药后72小时內中华绒螯蟹肝脏组织进行检测,恩诺沙星及其主要代谢物环丙沙星都可以检测到,为弄清楚恩诺沙星在中华绒螯蟹体内的分布、代谢的研究提供了检测方法。 2、在17±2℃条件下,研究了中华绒螯蟹肌肉注射每只蟹0.1 mL恩诺沙星(恩诺沙星原粉用双蒸水配成6.25 mg·mL~(-1))的药代动力学。中华绒螯蟹肌肉注射恩诺沙星后,血液中药物浓度很快达到峰值,并迅速向组织中分布,血药经时过程符合一级吸收二室开放代谢模型,主要药动学参数为:T_(1/2α)5.29h,T_(1/2β)92.42h,K_(21)0.078h~(-1),K_(12)0.048 h~(-1),K_(10)0.012h~(-1),AUC304.80μg·ml~(-1)h~(-1),CLs0.016 L·kg~(-1)h~(-1)。药物在血液中的药时曲线方程为C_(blood)=6.68e~(-0.49t)+3.38e~(-0.013t)。在中华绒螯蟹的血液及肌肉、肝胰腺、鳃组织中均能检测到恩诺沙星的代谢物环丙沙星残留,最低检测限为10μg·kg~(-1)。 3、研究在17、23和29℃水温下,恩诺沙星(ENR)在中华绒螯蟹血淋巴、肌肉和肝脏组织中的代谢规律和组织分布的影响。以3.0 mg·kg~(-1)剂量单次肌肉注射给药,于给药后1、10 min及0.5、1、2、8、16、24、48、72和168 h取各组织样品,药物含量由高效液相色谱法同时测定。研究结果表明,在3个温度下,血淋巴和肌肉组织中ENR含量瞬时达到峰值,而肝脏中ENR含量则随给药时间,先上升后下降,各组织含量从大到小依次为:血淋巴、肝脏、肌肉。水温23和29℃下,CIP含量及CIP与两种药物含量之比从大到小依次为:肝脏、血淋巴、肌肉;各组织中CIP含量及CIP与两种药物含量之比与水温呈正相关。应用药代动力学计算软件3P97分析结果表明:肝脏组织中ENR的代谢规律符合二室开放模型,在给定3个温度下,吸收半衰期(分别为:1.81、0.97和0.14 h)、消除半衰期(分别为:240.27、60.57和37.59 h)、药时曲线下总面积(分别为:2148.7、324.2和264.5μg·mL~(-1)·h~(-1))与温度呈负相关,而总消除率与溫度呈正相关,分别是0.0014、0.0093和0.011 L·kg~(-1)·h~(-1)。 4、研究了恩诺沙星与中华绒螯蟹血浆的蛋白结合率。实验结果显示:恩诺沙星与牛血清白蛋白(1.0mg·mL~(-1))的蛋白结合率在13.0%~29.0%之间。实验测定的中华绒螯蟹血浆蛋白浓度为64.0±0.3mg·mL~(-1),蛋白分子量主要集中在66.2KDa~97.1KDa之间,恩诺沙星与中华绒螯蟹血浆蛋白的结合率在50.0~78.8%之间。实验结果认为,恩诺沙星与中华绒螯蟹血浆50%左右的蛋白结合率能充分保证其药效的发挥,可以在中华绒螯蟹养殖过程中考虑使用。 5、研究了单次肌肉注射恩诺沙星在中华绒螯蟹体內的休药期。实验数据通过药代动力学分析软件3P97在电脑上进行分析。中华绒螯蟹在肌肉注射恩诺沙星后经时过程符合二室开放模型,并计算出其主要药动学参数。以Michaelis-Menten动力学理论作为基础,以中国药理学会数学药理专业委员会编写的3P97实用药动学计算程序计算出的参数作为条件,建立了利用迭代法推算渔药休药期的方案。并确定,中华绒螯蟹肌肉注射恩诺沙星的休药期定在600度日(天*℃)。 综上所述,本文较系统研究了恩诺沙星应用于中华绒螯蟹的药物残留检测方法、代谢动力学、蛋白结合率,并确定了休药期,对中华绒螯蟹质量安全生产具有明确的指导作用,实际效益显著。……   
[关键词]:中华绒螯蟹;恩诺沙星;环丙沙星;药物残留;高效液相色谱法;药物代谢动力学;蛋白结合率;休药期
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:南京农业大学2007年